基因型  

F-λ-fhuA2[lon]ompTlacZ::T7gene1galsulA11Δ(mcrC-mrr)114::IS10R(mcr-73::miniTn10-TetS)2R(zgb-210::Tn10)(TetS)endA1[dcm]  

产品说明  

High5TM系列ER2566感受态细胞为lon和ompT蛋白酶缺陷菌株。膜外蛋白酶OMPT的缺失能够有效防止表达的异源目的蛋白在细菌体内的降解。ER2566感受态细胞采用特殊化学试剂制作，可用于DNA的化学转化，经pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg。  

操作方法  

1.取100μl冰上融化的ER2566感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。  

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。  

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。  

注意事项  

1.感受态细胞最好在冰上融化。  

2.混入质粒时应轻柔操作。  

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。  

4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。  

5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。