一、概述

氨基活化琼脂糖磁珠（Magarose-NH₂）是一种6%交联的磁性琼脂糖微球，磁珠在长间隔臂的末端含有反应性伯胺，含有羧基（-COOH）的分子共价偶联，用于亲和纯化。凝胶对于固定肽而言是理想的，用于抗体或其他结合配偶体的亲和纯化。

尽管其他胺反应性方法可将分子固定化在氨基活化琼脂糖磁珠上，但碳二亚胺（EDC）在交联剂中是独特的，使得能够通过-COOH偶联。在近中性至酸性pH缓冲液中，EDC能有效地与羧酸盐反应形成中间体酯，其与亲核试剂如氨基活化琼脂糖磁珠上的伯胺反应。在大多数亲和纯化方法中，分子和琼脂糖凝胶载体之间产生的酰胺键是稳定的，并且可防渗漏。

氨基活化琼脂糖磁珠也适用于通过5′-磷酸基团固定寡核苷酸。在咪唑存在下，EDC以与羧酸盐大致相同的方式有效地与磷酸基团反应。

二、产品特性

注：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关，此处仅作参考值。

三、使用方法

1. 重要产品信息

• 使用EDC时，氨基磁珠将与C-末端、天冬氨酸或谷氨酸残基的侧链-COOH相偶联。因为肽还含有伯胺（N-末端和赖氨酸残基的侧链），使用EDC的偶联将导致肽的聚合以及它们固定到凝胶支持物上。通常这种聚合对随后的亲和纯化方法无害。
• 连接水不溶性肽或其他分子时，请使用与水混溶的溶剂，如乙醇、甲醇、DMSO或DMF。首先将肽溶解在水混溶性溶剂中，然后将该溶液加入偶联缓冲液中。偶联反应中高达50％的有机溶剂浓度是相容的，除非已知肽在该浓度下变性。
• 传统上，MES缓冲液用于EDC反应，因为它不含有竞争性的胺或磷酸盐，并且有效地保持了最佳的偶联酸条件。然而，如果需要，可以替换其他缓冲液，并且偶联将有效地进行至pH 7.2。尽管磷酸盐缓冲液可以与EDC反应，但降低偶联效率。乙酸盐、Tris和甘氨酸缓冲液与EDC或O-酰基异脲中间体反应，不是合适的偶联缓冲液。另外，避免使用含有硫醇的缓冲液，这些硫醇不可逆地结合EDC并使之失活。碘化物、氯化物和溴化物等卤化物对pH值为5和7之间的EDC几乎没有影响。
• EDC / Magarose-NH₂方法也可用于通过5′-磷酸基团固定寡核苷酸。