阿折地平片说明书

阿折地平片说明书

药品名称 通用名称:阿折地平片
汉语拼音:azhedipingpian
主要成份 本品主要活性成份为:阿折地平。
适应症 高血压
功能主治 本品适用于治疗高血压症,可单独使用,也可与其他抗高血压药物合用。
用法用量 早餐后口服,一日一次。 成人的初始剂量为8mg每日一次,最大剂量为16mg每日一次。 剂量调整应根据患者个体反应进行。一般的剂量调整应在7~14天后开始进行。
规格 8mg
不良反应 阿折地平在日本的临床研究提示,在总共1103例患者中共有159例(占14.4%)出现不良反应(自觉症状以及临床检查值异常)。在383例65岁以上老年患者中有48例出现不良反应(占12.5%)。 在日本上市后的第4次安全性定期报告中,使用结果显示:5146例患者中有182例出现不良反应(包括临床检查值异常)(占3.5%)。 1. 不良反应种类发生频率0.1~1%以下: 1 过敏:皮疹,瘙痒。 2 中枢神经系统:头痛·头重、打颤、眩晕。 3 消化系统:胃部不适、恶心  循环系统惊悸、发烧、倦怠感、面部潮红。 4 血液:肝脏ALTGPT、ASTGOT、LDH、γ-GTP等升高、肝功能异常、ALP升高总胆红素升高。 5 肾脏:BUN升高。 6 其他尿酸、总胆固醇、CKCPK、钾升高钾低下、尿内结晶增加、浮肿。 2. 不良反应种类发生频率0.1%以下: 1 便秘、腹痛 2 血液:嗜酸细胞增多 3 肝脏:总胆红素升高
禁忌 1. 妊娠或可能妊娠的妇女。2. 对本品有过敏史的患者3. 正在使用唑类抗真菌剂(伊曲康唑、咪康唑等)、HIV蛋白酶抑制剂(利托那韦、沙奎那韦、茚地那韦)的患者。
注意事项 1. 慎用 1 严重肝功能不全的患者应慎用因本品在肝脏中代谢。 2 严重肾功能不全的患者应慎用一般情况下,严重肾功能不全的患者伴随降压可能会导致肾功能减退。 3 老年患者见“老年用药”。 2. 重点注意事项 1 据报道,突然停用钙拮抗剂时会使高血压病情加剧,停用本品时,应在医生的指导和密切观察下,缓慢减量直至安全停药。 2 给予本品时,很少数患者可能会出现血压过低,在此情形下应采取减量或停药等适当的措施。 3 因降压作用可能会出现头晕,因此高空作业、车辆驾驶、操作危险机械时应予注意。 3. 其他注意事项 在服用本品并施行CAPD持续不卧床腹膜透析的患者,若透析排液出现白色混浊,应注意鉴别可能的腹膜炎等。
药物相互作用 本品主要被肝细胞色素酶P450 3A4(CYP3A4)代谢。1. 合用禁忌(禁止合用)(1) 唑类抗真菌剂(伊曲康唑Itraconazole、咪康唑Miconazole):据报道,与伊曲康唑合用后本品的AUC值升高至2.8倍。这些药物抑制CYP3A4,降低本品的清除率。(2) HIV蛋白酶抑制剂(利托那韦、沙奎那韦、茚地那韦):合用时可能增强本品的作用。这些药物抑制CYP3A4,降低本品的清除率。2. 慎重合用(合用时应予注意)(1) 其他降压药:可能出现过度降压,必要时应减量服用其他降压药或本品。因与作用机制不同的药物合用,使药理作用增强。(2) 地高辛:据报道,合用后地高辛的Cmax升高至1.5倍,AUC升高至1.3倍,必要时,地高辛应减量使用。由于阻碍地高辛从肾肾小管分泌以及从肾外的排泄。(3) 西咪替丁、甲磺酸依麦替尼布、甲磺酸地拉韦定Delavirdine Mesilate、大环内酯类抗生素、红霉素、克拉霉素等:合用时可能会增强本品的作用,必要时可减小本品的剂量或停止使用这些药物。这些药物抑制CYP3A4,降低本品的清除率。(4) 辛伐他汀:据报道,合用时辛伐他汀的AUC升高至2倍,必要时应停止使用本品或辛伐他汀。这些药物竞争性抑制CYP3A4,降低相互的清除率。肾功能障碍患者尤应注意。(5) 环孢霉素:合用时可能会增强本品或这些药物的作用,必要时应停止使用本品或这些药物。(6) 苯二氨卓类药物、安定、咪达唑、三唑苯二氮、口服黄体、卵泡激素类、口服避孕药等:合用时可能会增强本品或这些药物的作用,必要时应停止使用本品或这些药物。这些药物竞争性抑制CYP3A4,降低相互的清除率。(7) 枸橼酸坦度螺酮:合用时可能会增强本品的作用,必要时可减小本品的剂量或停止使用枸橼酸坦度螺酮。通过5-羟色胺受体的中枢降压作用进一步增强降血压作用。(8) 利福平、苯妥因、苯巴比妥:合用时可能减弱本品的作用。这些药物的代谢酶诱导作用使本品的清除率增加(9) 葡萄汁:据报道葡萄汁可使本品的血中浓度增加,降压作用增强,故使用本品时注意不要饮用葡萄汁。葡萄汁中所含成份抑制CYP3A4酶对本品的代谢,降低本品的清除率。

CIL品牌代理商

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1. CIL品牌介绍
美国剑桥同位素CIL是世界上第一个生产稳定性同位素标记化合物的生产商,以其领先的技术雄踞同位素分离领域。主要标记性同位素有13C、12C、D、15N、18O和17O,目前已经拥有8000多种
标记化合物。CIL的产品均能应用于不同的领域,如物理,化学,生物医学,分析,诊断研究以及环境测试。
2. CIL重点产品
稳定性同位素标记化合物
3. CIL官网
http://www.isotope.com/cil/index.cfm
4. 金畔生物代理CIL品牌联系方式
上海金畔生物科技有限公司
地 址: 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编: 201208
qq: 2743691513
固话总机:021-50837765
订货热线:15221999938
网 址: www.jinpanbio.com
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Originally posted 2015-04-25 18:13:34.

Lonza品牌代理商

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1. Lonza品牌介绍
Lonza(龙沙):瑞士的制药化工巨头,龙沙集团是一家以生命科学为主导,在生物化学、
精细化工、功能化学等行业均处于领先地位的全球性跨国公司。具有一百多年历史,总部位
于瑞士巴塞尔,在欧洲、美洲、亚洲总共有35个研发和生产中心,其中LONZA的大部分生物
技术产品在美国研发生产。LONZA(龙沙)主要生产生命科学产品以及多种类的精细和特殊化
工产品,以高科技生物技术与优质产品闻名世界。生命科学产品线包括细胞生物学,分子生
物学,生物检测和内毒素检测试剂。
2. Lonza重点产品
细胞生物学,分子生物学,生物检测和内毒素检测试剂
3. Lonza官网
http://bio.lonza.com/200.html
4. 金畔生物代理Lonza品牌联系方式
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1. Lonza品牌介绍
Lonza(龙沙):瑞士的制药化工巨头,龙沙集团是一家以生命科学为主导,在生物化学、
精细化工、功能化学等行业均处于领先地位的全球性跨国公司。具有一百多年历史,总部位
于瑞士巴塞尔,在欧洲、美洲、亚洲总共有35个研发和生产中心,其中LONZA的大部分生物
技术产品在美国研发生产。LONZA(龙沙)主要生产生命科学产品以及多种类的精细和特殊化
工产品,以高科技生物技术与优质产品闻名世界。生命科学产品线包括细胞生物学,分子生
物学,生物检测和内毒素检测试剂。
2. Lonza重点产品
细胞生物学,分子生物学,生物检测和内毒素检测试剂
3. Lonza官网
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ChromaDex品牌代理商

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1. ChromaDex品牌介绍
Chromadex 公司于1999年在加拿大成立,主要生产植物化学/中草药对照品以及标准材料,是植物参考标准的创造以及植物化学物质的产品和服务的市场领导者, ChromaDex公司提供
多达3000种产品和试剂盒,满足了自然产品的参考标准品、材料、业务的需求。现在是仍然通过严谨的科学以顾客为中心发展参考标准品和业务。
Chromadex是一个生产天然产品的创新性的公司,提供专有的、科学性的溶剂和配料,它们可用于食品强化剂、食品和饮料、化妆品和制药行业。特别是,Chromadex 公司研发和销售植
物化学和植物学的参考标准品和材料。生产和销售新颖的和天然的对人类健康有积极影响的产品。凭着公司的专业的服务和严谨的科学给市场带去安全与高品质。为了满足市场对天然产品的
标准品、材料和服务不断增长的需求,Chromadex 公司在1999年应运而生。随着各种消费类产品的出现,越来越多的消费者和政府机构要求有质量保证的研究方法,
如今Chromadex公司采取以科学严谨性为支撑的消费者为中心的方式,在参考标准品这服务性行业中处于领先地位。它在市面上的专业技术赋予它独特的基础,使它可以结合科学健康的自
然力量去开发和销售天然和新颖的配料。
2. ChromaDex重点产品
植物化学/中草药对照品
3. ChromaDex官网
http://https://chromadex.com/default.aspx
4. 金畔生物代理ChromaDex品牌联系方式
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HTL品牌代理商

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1. HTL品牌介绍
波兰High Tech Lab公司生产高质量实验及临床仪器、耗材产品。该公司由两部分组成:位于Warsaw的PZ HTL S.A.生产精密测量产品;位于Ozorkow的HTL-STREFA Sp.zo.o.生产实验室耗
材及外科刀具。HTL产品通过了ISO9001质量体系认证,其中HTL Strefa Sp.zo.o.生产的医学产品符合欧盟Directive 93/42/EEC标准、并携带有CE标志,为美国食品与药物管理局(FDA)注册产
品。
HTL有20多年的精密移液器设计、生产经验,是世界上20多个品牌的移液器OEM工厂,HTL自有品牌的移液器更是在自己独有的制造水平之上博采众长,成为世界具有世界顶级品质的产品。
DISCOVERY系列移液器更是集HTL公司20多年制造经验之精华的扛鼎之作。
2. HTL重点产品
HTL有20多年的精密移液器设计、生产经验,是世界上20多个品牌的移液器OEM工厂,HTL自有品牌的移液器更是在自己独有的制造水平之上博采众长,成为世界具有世界顶级品质的产品。
DISCOVERY系列移液器更是集HTL公司20多年制造经验之精华的扛鼎之作。
3. HTL官网
http://www.htl.com.pl/
4. 金畔生物代理HTL品牌联系方式
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上海金畔生物代理品牌产品及货期

上海金畔生物代理品牌产品及货期

现在,生命科学依旧是我们的业务核心,我们还涉足其它领域,产品分为生命科学,健康保健,新材料和仪器设备四大板块。我们提供一系列创新产品,包括生化试剂、临床诊断试剂、免疫试剂、生物制品、生物制药原料、精细和化妆品行业专用化学品、保健品原料、天然提取物、聚合物、新材料、医用及实验室耗材、仪器设备等。
上海金畔生物科技不仅是美国APSC聚合物标准品在中国的独家代理,还同时是Wako生化试剂、Reagecon物理和化学标准液、BioPorto、Fortis色谱耗材、LaysanBio 修饰性PEG、Bivendor Elisa试剂盒及原料、Lumiprobe 化学发光产品、Ludger糖生物学等品牌授权经销商。种类齐全,到货迅速。上海金畔生物科技有限公司——生物制药、生物诊断原料和科研试剂综合供应商。

主要代理和经销品牌

1、授权代理

公司品牌

Logo

相关产品

货期

WAKO

日本WAKO提供各种生物化学、分析化学、有机化学/合成、环境分析、食品·医药品分析、高纯度及认证标准品等约50万种试剂。

3-4周

BioPorto

丹麦Bioport提供肾功能损伤早期诊断试剂盒和抗原、抗体,包括早期肾衰竭ELISA试剂盒NGAL(FDA认可)、MBL、Gc-globulin、ELISA Kit。

3-4周

APSC

美国APSC主要提供有机凝胶色谱标准品和水性凝胶色谱标准品两类产品,用于校正仪器,测定聚合物样品的分子量。

3-4周

Reagecon

Reagecon公司获得INAB(ISO17025)认证。产品包括pH标准液、电导率标准液、pH电子清洗液、ICP、离子标准液、等物理和化学标准液,应用于分析化学、生物化学、生命科学、环境和高校研究机构。

3-4周

Ludger

英国Ludger公司是一家专注于测量与控制生物医药糖基化的公司提供:Glycan Release Kits 聚糖释放kit;Glycan Labeling Kits 聚糖标记kit;Glycan Purification Kits 聚糖纯化Kit ;Glycan HPLC columns 聚糖HPLC柱、N连接聚糖标准品、2-AA标记聚糖标准品、2-AB标记聚糖标准品。

3-4周

Fortis

Fortis旨在为HPLC市场提供创新的产品,提供的填料范围广,从UPLC1.7um到10um。产品包括:UPLC,RP、NP、HILIC等色谱柱。

2-3周

Lumiprobe

Lumiprobe Corporation是美国一家高品质生物技术公司,专业提供分子生物学研究用的活性荧光染料。产品主要有:活性染料(Reactive Dye)和SYBR Green I 染料,用于寡核苷酸合成的亚磷酰胺,点击化学和其它试剂。

2-3周

Biovendor

BioVendor Laboratory Medicine, Inc. 是欧洲的一家医药科技公司,专注于为分子和细胞学实验室提供体外研究产品,主要产品有重组蛋白、抗体和ELISA试剂盒。目前公司致力于有关激素和细胞活素利用方面的研究,产品相关方向:能量代谢和体重调节;骨代谢;心血管疾病和肾病;感染和发炎;铁代谢研究;肌肉生长控制;神经组织损坏标记;肿瘤学;胰腺调节分子;分泌型磷脂酶A2等。

3-4周

2、生化试剂

Hampton

美国Hampton公司是蛋白质晶体研究方面的专家,为广大研究人员提供了极大的方便,促进了蛋白质晶体的研究,为世界范围内的蛋白质晶体研究人员所信赖。

4周

Megazyme

爱尔兰Megazyme公司提供超过70种诊断试剂盒和超过300种其他试剂和底物用于检测谷物,食品,饲料,发酵,乳制品和葡萄酒行业。其中欧洲检测果汁及葡萄酒等发酵产品基本都采用该公司产品。

2-3周

AATBioquest

AAT Bioquest提供反应荧光探针和发光探针、生物素和端粒酶能、荧光和发光探针、新型荧光和发光探针、提供生理和神经探针,特别是钙离子指示剂和膜电位探针。

3-4周

Epigentek

Epigentek提供DNA修饰试剂盒、染色质免疫沉淀反应试剂盒、非放射性DNA/组蛋白转甲基酶激活抑制试剂盒、DNA-蛋白交联试剂盒、位点特异的组蛋白甲基化试剂盒、表形相关的抗体等。

3-4周

Worthington

美国Worthington是世界上最重要的酶类供应商,酶类产品主要是胶原酶类,胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,弹性蛋白酶,和脱氧核糖核酸酶。

3-4周

Cayman

Cayman公司可以提供2,138 多种生化和免疫试剂,涉及肿瘤、氧化氮、神经学、凋亡、氧化性损伤、内分泌学等研究领域。

3-4周

Millipore

Millipore有3个业务部门组成:实验室解决方案部,生物科学部和过程方案部。

4-6周

Anaspec

AnaSpec公司提供专业知识肽,检测试剂,抗体检测试剂盒,寡核苷酸和qPCRs。AnaSpec还提供一流的定制服务,包括多肽合成,抗体生产,研发分析,寡核苷酸合成。

3-4周

MP BIO

美国MP Biomedicals公司提供:DNA/RNA分离和纯化试剂盒、核酸抽提仪器、腺病毒载体、FISH探针、PCR相关试剂、即用型培养基、基因表达和分析研究试剂盒、转染试剂、限制性内切酶、电泳和杂交试剂等。

3-4周

Active Motif

美国Active Motif公司是世界上最大的转录因子研究试剂生产商。为全球从事基因功能研究、基因表达调控及其编码蛋白研究的科研人员,提供高质量的产品和优质的服务。

3-4周

Innova Biosciences

Innova Biosciences 公司专注于生物偶联技术(bioconjugation)–即将两种分子结合在一起形成一个杂合结合物(hybrid conjugate)。Innova提供“一步法”抗体标记试剂盒-Lightning-Link™系列产品极大程度的简化了结合标记流程。

3-4周

Sartorius
赛多利斯

赛多利斯生物技术部门专注于过滤、液体管理、发酵和细胞培养、纯化以及实验室应用。

6-8周

LKT Labs

美国LKT Labs主要提供:癌症药物、药物发现试剂盒、天然产物、广泛的生命科学研究试剂、定制合成。在LKT Labs 可以找到在其他地方找不到的产品。

2-3周

Mirusbio

Mirus以“非病毒(如基于质粒DNA)基因转移方法比利用病毒来转移基因具有明显的优势”为理念而建立。是核酸研究试剂开发的领跑者,其许多杰出成就受到世界公认。

4周左右

Cygnus

Cygnus生物公司是一家专为疫苗生产企业、基因工程药企、研发部门及QA部门提供污染物检测产品的世界著名的美国公司。

3-4周

AppliChem

德国APPLICHEM公司的试剂在欧洲有“小SIGMA”的美誉,产品质量和SIGMA相媲美,价格比其它进口产品更低。覆盖了免疫学、细胞学、分子生物学、蛋白组学、植物学、制药与诊断试剂研发生产等领域。

现货3-5天
期货4周

Biovision

BioVision公司提供用于检测早、中、晚期凋亡的试剂,可以检测凋亡发生的不同区域,包括:线粒体、胞浆、胞膜及胞核。研究趋势有细胞凋亡、细胞增殖、细胞损伤与压力、细胞信号、细胞分馏、胆固醇及肥胖、代谢、分子生物学。

4周

ENZO

ENZO为生命科学研究者提供基因组分析,细胞生物学,翻译后修饰,信号转导,肿瘤和免疫学,药物筛选等相关领域的优质产品。

3-4周

3、天然脂和凝脂

公司品牌

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相关产品

货期

Avanti

美国Avanti主要为各种制药厂和研究机构提供从毫克级到公斤级乃至百公斤级的磷脂类和甾体类中间体和试剂。

4周左右

Larodan

瑞典Larodan是一家专业生产天然酯类生化试剂的公司,主要包括胆酸及甲酯、胆固醇及酯、辅酶A及酰基辅酶A、共轭亚油酸、二元酸及酯、支链/直链脂肪酸甲酯、标记物、神经节苷酯、甘油酯、磷脂等3000多种。

2-3周

4、抗体

公司品牌

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相关产品

货期

GeneTex

美国GeneTex公司提供癌症研究相关抗体。目前抗体总数已逾45,000种,且每月推出近400种新抗体。其中,兔多抗和鼠单抗为其优势产品。

3-4周

Agrisera

瑞典Agrisera公司致力于植物/环境科学研究中所需蛋白抗体研发与销售,主要集中于模式之物及其他植物的生理、病理相关的蛋白抗体。Agrisera的所有抗体分两大类:植物及藻类的抗体,以及细菌、真菌、昆虫、鱼等动物类抗体,植物领域的抗体。

3-4周

ProSpec

ProSpec可以提供细胞因子,生长因子,激素,信号蛋白,病毒抗原等近800种重组蛋白和100多种抗体。绝大部分产品是天然成熟型蛋白,而不含有标签蛋白。

3-4周

AbD Serotec

英国Serotec公司可以提供上万种抗体和免疫学试剂、单抗制备和多种规模的抗体生产和标记服务。主要产品系:Human CD、Rodent、Veterinary、Cell biology and Apoptosis、Flow Cytometry、Immunohistology、Secondary Reagents;其中大鼠抗体和各种动物研究试剂,Serotec在全世界处于领先地位。

3-4周

eBioscience

美国ebioscience专注在人和小鼠的CD系列/细胞因子相关试剂流式抗体.大部分产品的克隆号与PMG一样,产品种类丰富:包括人、小鼠和大鼠的免疫学相关试剂。

3-4周

KPL

KPL是美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司,同时也是世界上最大的二抗和底物显色系统生产商。产品有:亲和纯化的二抗、ELISA底物及试剂盒,蛋白检测和纯化试剂盒,核酸标记和检测等试剂,金标记、生物素标记、细菌抗体等。

大部分有现货
周二下单
期货3-4周

CST

美国CST是提供特色的信号转导检测用抗体及磷酸化抗体,ELISA试剂盒,激酶等产品。

3-4周

5、校准及分析标准品

公司品牌

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相关产品

货期

USP

美国药典是美国政府对药品质量标准和检定方法作出的技术规定,也是药品生产、使用、管理、检验的法律依据。NF收载了美国药典(USP)尚未收入的新药和新制剂。

3-4周

EP

《欧洲药典》为欧洲药品质量检测的唯一指导文献。所有药品和药用底物的生产厂家在欧洲范围内推销和使用的过程中,必须遵循《欧洲药典》的质量标准。

3-4周

BP

英国药典是英国药品委员会正式出版的英国官方医学标准集,是英国制药标准的重要出处,也是药品质量控制、药品生产许可证管理的重要依据。

3-4周

NIST

美国国家标准局(NIST)制定的“标准参照样品(SRM)”,共有1100多种,每种标样都有美国国家标准局的详细分析报告和用途说明。

3-4周

LGC

LGC是Laboratory of the Government Chemist的简称,中文名英国政府化学家实验室,是化学和生物计量、法医、诊断科学服务及标准物质方面的市场领导者。

3-4周

TRC

加拿大TRC公司是一家专业生产药品、药品代谢物、物质同位素标记物、药物杂质等分析标准品的公司

3-4周

TLC

加拿大TLC标准品, TLC是独立的服务公司,专业定制合成复杂的有机化学物质对生物医学和制药研究

3-4周

DR

德国Dr.Ehrenstorfer公司是欧洲提供环境标准品的主要公司之一。具有超过40年的生产历史,现在可以提供超过5,000种的化学标准品

3-4周

Chiron

挪威Chiron标准品,CHIRON 公司是挪威的一家20年历史的稳定性同位素供应商。

3-4周

ChromaDex

ChromaDex公司的产品主要包括:化合物对照品、植物化学对照品、试剂盒 ;美国草药药典标准品。

3-4周

ChemService

通过美国实验室证学会认证,生产化学标准品的专业厂商。

3-4周

6、糖生物学

公司品牌

Logo

相关产品

货期

TdB

TdB公司提供葡聚糖、硫酸葡聚糖、葡聚糖衍生物:DEAE-葡聚糖、CM-葡聚糖、Q-葡聚糖、苯基葡聚糖等、FITC标记葡聚糖、FITC标记菊糖、TRITC-标记葡聚糖、蓝色葡聚糖等

2-3周

Iduron

英国Iduron是专业从事糖胺生产和销售的公司,为从事科研及产品开发提供独特和优质的GAGs产品.

3-4周

Elicityl

法国的Elicity公司提供200多种多糖和寡糖。其中的60多种低聚糖有众多不同领域的应用潜力,如防癌疫苗,抗感染,抗神经退化,诊断或功能性食品等。

3-4周

DEXTRA

英国Dextra公司提供研究用糖库,主要用来探索功能糖和筛选酶抑制剂。

3-4周

7、微生物和细胞组织培养

公司品牌

Logo

相关产品

货期

Nissui

Nissui提供全面的食品工业,诊断工业生产和研究用培养基,包括细胞培养基、微生物培养基、致密固体培养基Compact Dry等。

4周

Phytotech

美国PhytoTechnology是一家专门从事于研发和生产植物组织培养基,已经成为了世界上著名的植物生物学类产品的生厂商和原料供应商。

4周左右

Gibco

Gibco提供DMEM,MEM,RPMI1640等液体及粉末细胞培养基,无血清培养基和专用培养基,各种种属的优质动物血清,氨基酸,抗生素,生长因子等细胞培养添加剂,昆虫细胞以及293等哺乳动物细胞。

现货1周
期货1个月

Hyclone

HyClone公司提供高品质胎牛血清(FBS)及其他血清产品、各类经典的细胞培养基、无血清和无蛋白培养基,

3M

3M 公司提供微生物检测产品主要应用于食品、饮料及相关行业的微生物检测,在全球食品检测领域均有广泛的使用。

期货4周

OXOID

Oxoid公司提供培养基、微生物培养、诊断试剂、生化鉴定、药敏纸锭。产品范围阔及与疾病、微生物诊断相关的临床检验科学、基础学术研究与工业生产领域。

期货:6-8周
LP21,LP42常备

8、聚合物类

公司品牌

Logo

相关产品

货期

LaysanBio

美国Laysan Bio提供PEG试剂用于7个FDA或欧盟批准的药品或医疗器械,包括Neulasta®, Somavert®, PEGASYS®, PEG-INTRON®, Definity®, Macugen® and DuraSeal™。

3-4周

Polymer source

加拿大Polymer Soruce主要提供:A.稳定的氘代聚合物;B.特种聚合物;C.特种单体和齐聚物;D.高纯化学试剂等。

3-4周

Polymer factory

瑞典Polymerfactory致力于聚合物研究,产品线包括:Dendrimers 树枝状聚合物、树突聚合物、超支化聚合物、树枝状多功能PEGS、质谱标准品等。

3-4周

Scientific Polymer

美国Scientific Polymer提供广泛的产品:单体&增塑剂、增塑剂套装、色谱柱、除对苯二酚和甲醚对苯二酚柱、除t-丁基邻苯二酚柱、聚合物标准品、离子交换树脂、聚合物套装和根据客户需要定制产品。

3-4周

Rapp Polymers

德国Rapp Polymers提供创新性的先进的树脂,使TentaGel树脂商业化。随后研发生产出PEG衍生物。为固相合成(SPS)提供广泛地高质量的树脂及广泛地聚乙二醇衍生物(PEG)。

3-4周

9、耗材类

公司品牌

Logo

相关产品

货期

Agilent

安捷伦科技有限公司是世界最大的测试测量公司,是全球电子测量、生命科学与化学分析的领导者。

货期视库存定

NUNC耗材

NUNC致力于为世界各国的科研人员提供顶级的一次性塑料实验器具。其中,细胞培养系列产品,酶标系列产品,细胞工厂系列产品,以及冷冻保藏系列产品等已经成为生命科学用户的首选。

现货10天
期货3个月

Rainin

RAININ(瑞宁)提供移液器及耗材。

现货3天
期货2周

ISOLAB

德国ISOLAB提供实验室耗材设备,包括玻璃器具、色层分析、微生物学、分析检测用耗材仪器、安全设备等。

4-6周

Labnet

美国Labnet公司主要产品有离心机、移液器、烘箱、培养箱、三维脱色摇床,电泳仪,凝胶成像系统等,产品畅销欧美各国。

大部分现货

Axygen

美国Axygen公司主要产品为实验室耗材,包括:吸头、PCR薄壁管、PCR板、PCR封口膜、离心管、离心管架和分离柱。

常用现货

Corning

Corning公司是凭借在光学、材料科学、特殊表面和生物方面等多专业领域内的丰富积累,康宁的一系列革命性解决方案,提高制药业产能,并使突破性发现成为可能。

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DSS诱导小鼠实验性肠炎建模参考文献

DSS诱导小鼠实验性肠炎建模参考文献
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简单介绍
探讨硫酸葡聚糖钠(dextran sodium sulphate,DSS)诱导的小鼠肠炎模型病变结肠组织的谷胱甘肽(GSH)变化及其与病变组织分泌的Th1/Th2型细胞因子IFN-g,IL-4及黏膜损伤的关系
DSS诱导小鼠实验性肠炎建模参考文献  的详细介绍
DSS诱导小鼠实验性肠炎建模参考文献
GSH在DSS诱导的小鼠实验性肠炎中的作用
张  静, 韩  英, 纪  欣, 王志红, 李虹义, 郑  力
张静, 中国人民解放军总医院军医进修学院  北京市  100853
韩英, 纪欣, 王志红, 李虹义, 郑力, 北京军区总医院消化内科  北京市  100700
张静, 女, 1973-05-02生, 河北保定人, 汉族. 1997年承德医学院本科毕业, 解放军总医院军医进修学院2002级硕士研究生, 主治医师, 主要从事炎症性肠病的发病及免疫机制等方面的研究.
北京市自然科学基金资助项目, No. 7042064
通讯作者: 韩英, 100853, 北京市东城区南门仓5号, 北京军区总医院消化内科.
电话: 010-66721009
收稿日期: 2005-04-11    接受日期: 2005-04-27
Roles of Glutathione in dextran sodium sulphate-induced colitis in mice
Jing Zhang, Ying Han, Xin Ji, Zhi-Hong Wang, Hong-Yi Li, Li Zheng
Jing Zhang, Postgraduate Medical School, General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100853, China
Ying Han, Xin Ji, Zhi-Hong Wang, Hong-Yi Li, Li Zheng, Department of Gastroenterology, General Hospital of Beijing Military Command, Beijing 100700, China
Supported by the Natural Science Foundation of Beijing, China, No.7042064
Correspondence to: Dr. Ying Han, Department of Gastroenterology, General Hospital of Beijing Military Command, 5 Nanmencang, East District, Beijing 100700, China.
Received: 2005-04-11    Accepted: 2005-04-27
Abstract
AIM: To investigate the expression of glutathione (GSH) in dextran sodium sulphate(DSS)-induced colitic mucosa and its relationship with cytokine secretion as well as mucosal injury.
METHODS: BALB/c mice in DSS group (n = 10) were fed with 50 g/L DSS to induce experimental colitis and those in normal controls (n = 10) were fed with distilled water. All the mice were killed after 7 days. The pathological changes of the colonic tissues were examined while immunohi-stochemstry was performed with GSH1 antibody to determine the GSH expression. ELISA was used to detect the expression of IL-4 and IFN-g.
RESULTS: The manifestations of acute colitis such as weight decrease, diarrhea and bloody stool appeared in mice of DSS group. focal crypt lesionsPathologically, focal crypt distortion, granulocyte and macrophage invasion were observed. The level of GSH in DSS group was significantly lower than that in control group (20.6 vs 3.14±1.0, t = 3.95, P = 0.01), whereas the expression of IL-4 was marked higher (38.7±4.7 vs 28.7±6.7, t = 3.16, P = 0.009). The content of IFN-g was decreased in DSS group (P>0.05).
CONCLUSION: Low expression of GSH is related to the increase of IL-4, decrease of IFN-g and mucosal injury in DSS-induced colitis in mice.
Key Words: Glutathione; Dextran sodium sulphate; Colitis; Mice; IL-4; IFN-g; Mucosal injury
Zhang J, Han Y, Ji X, Wang ZH, Li HY, Zheng L. Roles of Glutathione in dextran sodium sulphate-induced colitis in mice. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi  2005;13(12):1400-1403
摘要
目的: 探讨硫酸葡聚糖钠(dextran sodium sulphate,DSS)诱导的小鼠肠炎模型病变结肠组织的谷胱甘肽(GSH)变化及其与病变组织分泌的Th1/Th2型细胞因子IFN-g,IL-4及黏膜损伤的关系.
方法: 实验组小鼠(n = 10)给予含50 g/L DSS的蒸馏水自由饮用7 d之后处死,分离出的病变结肠一部分评价其病理学改变并用GSH1抗体做免疫组化,另一部分结肠培养后检测其IL-4、IFN-g的表达.对照组小鼠(n = 10)给予蒸馏水自由饮用7 d之后处死.
结果: DSS诱导实验性肠炎小鼠口服50 g/L的DSS溶液7 d出现体重减轻、腹泻、血便等急性肠炎的表现.病理学切片HE染色发现小鼠病变结肠腺体结构紊乱,黏膜和黏膜下单核细胞和多核细胞浸润.DSS组病变肠段组织GSH表达较对照组明显减少(2±0.6 vs 3.14±1.0,t = 3.95, P = 0.01<0.05),病变结肠分泌的IL-4明显升高(38.7±4.7 vs 28.7±6.7,t = 3.16, P = 0.009<0.01), IFN-g轻度降低(P>0.05).
结论: DSS诱导的实验性肠炎小鼠病变结肠组织GSH的减少与病变结肠组织分泌的细胞因子IL-4增加、IFN-g下降以及黏膜损伤相关.
关键词: 谷胱甘肽; 硫酸葡聚糖钠; 肠炎; 小鼠; IL-4; IFN-g;黏膜损伤
张静, 韩英, 纪欣, 王志红, 李虹义, 郑力. GSH在DSS诱导的小鼠实验性肠炎中的作用. 世界华人消化杂志  2005;13(12):1400-1403
http://www.wjgnet.com/1009-3079/13/1400.asp
0  引言
炎症性肠病炎(inflammatory bowel disease,IBD)是一组病因不明的慢性肠道炎症性疾病,包括了两种独立的疾病,溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD).虽然IBD的发病机制尚不清楚,目前发现其病因学机制与免疫异常、遗传影响、以及环境因素有关.近年来的研究发现,反应性氧簇(reactive oxygen species,ROS)产生过量对IBD的发展起着重要的作用.胃肠道黏膜自身有一些抗氧化防御系统,可以通过中和连续生成的ROS抵消其损害的影响.在这些防御网络中,内生硫氢基团,主要是还原型谷胱甘肽(GSH),在一些动物模型中对胃肠道黏膜细胞保护抵抗氧化应激起着重要的作用[1-2].以往对抗氧化剂作用的大量研究中,已经报道了在IBD患者和实验性肠炎中包括GSH在内的抗氧化剂水平的降低[3-4],而对于DSS诱导的实验性肠炎病变组织GSH的变化及其与黏膜损伤及细胞因子分泌的关系尚不明确,本实验将对上述问题进行研究和分析.
1  材料和方法
1.1 材料 雄性BALB/c小鼠,5-6周龄,质量18-22 g;DSS(Sodium Dextran Sulfate 5000,Wako Pure Chemical Industries Ltd.大阪,日本和光纯药工业株式会社);HBSS(Hank’s balanced salt solution,Sigma公司);无酚红、无抗生素的RPMI 1640(HyClone,公司);complete medium RPMI 1640(Cambrex公司);LPS(脂多糖,Sigma公司);DTT(1,4-Dithiothretol,二硫基苏糖醇,Sigma公司);胎牛血清FBS(中国杭州江滨生物技术有限公司);小鼠IL-4、IFN-g检测试剂盒(Sigma公司);GSH1:山羊GSH抗体(Santa Cruz公司,sc-15087);山羊SP试剂盒(北京中杉生物试剂公司).
1.2 方法 取10只BALB/c小鼠,将DSS加入蒸馏水中配成50 g/L的DSS溶液,给小鼠自由饮用7 d,8 d处死.正常对照组小鼠10只给予蒸馏水自由饮用7 d,8 d处死.各组小鼠处死后,先将整段结肠取下,测量结肠长度,肉眼观察结肠的形态,充血、溃疡、糜烂程度和范围,计算质量减少率.取充血、糜烂最明显部位的肠段(环状、片状各1块,正常组取回盲部及近肛门部组织环状、片状各1块)于中性甲醛溶液小瓶送检病理.便血评分:便血评分将取病理后的肠段纵行切开,其血性内容物用0-3+标准评价:0:无出血,1+:结肠1/3出血,2+:结肠2/3出血,3+:整个结肠均有出血.肠道标本积分:炎症细胞的渗出评分标准:0分-黏膜固有层内有极少量炎症细胞,1分-黏膜固有层内有较多的炎症细胞或黏膜固有层内的炎症细胞增多,2分-炎症细胞扩散至黏膜下层,3分-全层均有炎症细胞渗出;组织损伤评分标准:0分-没有黏膜损坏,1分-不连续的淋巴上皮损坏,2分-表层黏膜糜烂,3分-广泛的黏膜破损并向肠壁深层结构扩展[5].
1.2.1 病变组织GSH的表达 应用山羊GSH1抗对病变组织切片进行免疫组化分析,并根据阳性强度及阳性率评分的半定量标准.阳性强度评分标准:0分:(-),1分:(+),2分:(++),3分(+++).阳性率评分标准:0分:<10%,1分:10-25%,2分:26-50%,3分:>50%.总分为0-6分.
1.2.2 病变组织产生细胞因子的测定 将肠道病变组织标本置于含10 mmol/L DTT的HBSS中静置15 min,而后用RPMI1640液清洗肠段2次以除去DTT,在六孔培养板中加入含100 mL/L FBS 1 mL的RPMI1640共2 mL,置于CO2孵育箱内培养24 h,然后收集池内培养液,分装在3个eppindofe管中,-30℃冻存.应用小鼠IL-4,IFN-g检测试剂盒(ELISA法)测定IL-4,IFN-g.
统计学处理 应用STATA 7.0软件进行统计学处理,先用F检验,验证方差齐性,再进行t检验,P<0.05为差异有显著性.
2  结果
2.1 临床症状及病理学评价 BALB/c小鼠口服50 g/L的DSS溶液7 d成功诱导出急性肠炎,表现为体重减轻、腹泻、血便等.病理学切片HE染色发现小鼠左半结肠较右半结肠为重,结肠腺体结构紊乱,黏膜及黏膜下单核细胞和多核细胞浸润等.质量:DSS组小鼠体重下降而正常对照组体重增加(-0.7±0.8 g vs 2.4±0.9 g,t = -7.47,P = 0<0.001).血便:正常对照组小鼠结肠处死后结肠切开未发现血便,而DSS诱导组6只小鼠结肠发现血便(0.7±0.5 vs 0,t = 4.42,P = 0.003<0.001).结肠缩短:DSS诱导肠炎组小鼠与正常对照组小鼠比较,结肠有明显的充血,水肿,溃疡形成及长度缩短(9.2±0.6 vs 10.4±0.8,t = -3.72,P = 0.0 017 <0.01).病理评分:结肠病理切片HE染色发现,DSS诱导的实验性肠炎组小鼠的结肠局部腺体结构紊乱,黏膜及黏膜下中性粒细胞及单核细胞和多核细胞等炎性细胞浸润,黏膜局部糜烂,部分隐窝破坏,而对照组小鼠未发现上述变化(3.0±0.5 vs 0.4±0.7,t = -8.18,P = 0<0.001,图1).
2.2 小鼠结肠病变组织GSH表达 应用山羊GSH1抗对病变组织切片进行免疫组化分析,发现GSH主要表达在黏膜表面及腺体细胞的胞质内.通过半定量标准评分,发现DSS诱导实验性肠炎小鼠的病变肠段组织GSH表达明显低于对照组 (2±0.6 vs 3.14±1.0,t = 3.95,P = 0.01<0.05,图2).
2.3 小鼠病变结肠分泌的IFN-g及IL-4 DSS组病变肠段分泌的Th2细胞因子IL-4 显著高于对照组(38.7±4.7 vs 28.7±6.7,t = 3.16,P = 0.009<0.05);DSS组病变肠段分泌的Th1细胞因子IFN-g较对照组减少但差别无显著性(20.6±7.4 vs 23.2±5.6,t = -0.70,P = 0.50>0.05).由于DSS组IL-4显著升高,同时IFN-g下降,致IL-4/IFN-g升高,显著高于对照组(1.88,1.24).
图1  对照组和实验组小鼠结肠组织的病理变化(HE×200). A: 对照组; B: 实验组.
图2  对照组和实验组小鼠结肠组织GSH的表达(×100). A: 对照组; B: 实验组.
3  讨论
DSS诱导的BALB/c小鼠急性实验性肠炎模型表现为体重减轻,腹泻,血便等.病理学检查发现小鼠左半结肠病变较右半结肠为重,结肠黏膜腺体结构紊乱,单核细胞和多核细胞浸润,黏膜局部糜烂,部分隐窝破坏等[6-7].IBD患者的胃肠道炎症中渗透的大量炎症细胞包括巨噬细胞和中性粒细胞等通过产生反应性氧簇(reactive oxygen species,ROS)而将炎症肠道暴露于氧化应激中.而胃肠道黏膜自身有一些抗氧化防御系统,可以通过中和连续生成的ROS抵消其损害的影响.在这些防御网络中,内生硫氢基团,主要是还原型谷胱甘肽(GSH)起着重要的作用.GSH是一种包含一个巯基的非蛋白三肽,GSH大量存在于各种不同细胞中在多种生化过程中起着重要的作用.GSH构成细胞防御氧化损伤机制中的第一道防线,而且是普遍存在的细胞类型中的主要氧化还原缓冲剂.在其众多功能中,其含半胱氨酸的三肽可以减轻蛋白质的二硫化,减轻自由基和内毒素的毒性作用,并维持细胞内氧化还原的平衡[8].Sido et al[4]的研究发现与健康对照组比较IBD患者半胱氨酸浓度明显减少,其减低水平与疾病临床活动指数相关,去蛋白血浆中总的巯基成分均明显减少,术后3 mo恢复到正常水平.Zea-Iriarte et al[9]发现在TNS(三硝基苯硫酸,trinitrobenzene sulphonic acid)诱导的实验性肠炎中,GSH浓度及谷胱甘肽硫基转移酶,Cu,Zn超氧化物歧化酶均减低,但是谷胱甘肽过氧化物酶却增加.我们的实验研究发现 DSS组病变肠段组织GSH表达明显低于对照组 (2±0.6 vs 3.14±1.0,t = 3.95,P = 0.01<0.05),与文献报告相似,说明GSH不足与IBD和实验性肠炎的炎症相关,削弱黏膜的抗氧化能力可能会促进肠道的氧化损伤.
Th1和Th2细胞因子反应类型对于小鼠炎症和感染的慢性化和侵袭性可产生影响,是慢性肠道炎症重要的决定因素.Th1/Th2型反应平衡是由分泌细胞因子的类型决定的.Th1型是以通过伴随抗原提呈细胞(APC)生成的IL-12而产生IFN-g为特征.Th2型则是以低IFN-g/高IL-4和低IFN-g/高IL-10为特征[10].本实验中DSS诱导的实验性肠炎小鼠病变肠段分泌的IL-4明显增加,IFN-g下降,致IL-4/IFN-g显著升高,说明DSS诱导的急性实验性肠炎是以Th2型免疫反应为主的炎性改变.Peterson et al[11]和Murata et al[12]曾报道鼠的抗原提呈细胞(APC)或腹腔定居的巨噬细胞中GSH的损耗可使IL-12的分泌减少并导致典型的Th1细胞因子形式向Th2反应模式转化.Peterson et al[11]的研究还显示应用GSH损耗或补充药物时巨噬细胞内GSH的水平可以影响Th1/Th2细胞因子的倾向.且将来源于GSH损耗小鼠的T细胞与未处理的BALB/C鼠的巨噬细胞一起培养可产生正常量的IFN-g,因此IFN-g产量减少是由于巨噬细胞而不是T细胞中GSH损耗造成的.另外Jeannin et al[13]在研究易于产生IL-4的培养细胞系统中发现在培养液中增加GSH的水平可使IL-4的产量以量效依赖的方式减低.这些研究结果充分表明巨噬细胞内的GSH水平对于调节在免疫反应中向Th1或Th2细胞因子反应的发展趋势具有重要的作用.
总之,本研究结果显示DSS诱导的急性实验性肠炎小鼠病变结肠的组织GSH的减少与病变结肠组织分泌的细胞因子IL-4增加、IFN-g减低及结肠黏膜损伤有相关性,但是其机理不明.GSH的表达有可能影响不同类型炎性细胞因子的分泌进而影响黏膜组织的损伤.同时提示肠道黏膜免疫异常在IBD发病机制中的作用不容忽视,特别是巨噬细胞中的GSH的变化是否与黏膜炎症损伤及Th1/Th2细胞因子分泌的相关性有待于探讨.
4    参考文献
1    Goldin E, Ardite E, Elizalde JI, Odriozola A, Panes J, Pique JM, Fernandez-Checa JC. Gastric mucosal damage
in experimental diabetes in rats: role of endogenous glutathione. Gastroenterology  1997;112:855-863
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injury induced by HCl in the rat. Digestion  1993;54:91-97
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damage in active ulcerative colitis. Dig Dis Sci  1998;43:1088-1095
4    Sido B, Hack V, Hochlehnert A, Lipps H, Herfarth C, Droge W. Impairment of intestinal glutathione synthesis in patients
with inflammatory bowel disease. Gut  1998;42:485-492
5    Loher F, Schmall K, Freytag P, Landauer N, Hallwachs R, Bauer C, Siegmund B, Rieder F, Lehr HA, Dauer M, Kapp
JF, Endres S, Eigler A. The specific type-4 phosphodiesterase inhibitor mesopram alleviates experimental colitis in mice.
J Pharmacol Exp Ther  2003;305:549-556
6    Konrad A, Mahler M, Flogerzi B, Kalousek MB, Lange J, Varga L, Seibold F. Amelioration of murine colitis by feeding
a solution of lysed Escherichia coli. Scand J Gastroenterol  2003;38:172-179
7    Villegas I, Alarcon de la Lastra C, Orjales A, La Casa C. A new flavonoid derivative, dosmalfate, attenuates
the development of dextran sulphate sodium-induced colitis in mice. Int Immunopharmacol  2003;3:1731-1741
8    Murata Y, Amao M, Yoneda J, Hamuro J. Intracellular thiol redox status of macrophages directs the Th1 skewing
in thioredoxin transgenic mice during aging. Mol Immunol  2002;38:747-757
9    Zea-Iriarte WL, Makiyama K, Goto S, Murase K, Urata Y, Sekine I, Hara K, Kondo T. Impairment of antioxidants in
colonic epithelial cells isolated from trinitrobenzene sulphonic acid-induced colitis rats. Protective effect of
rebamipide. Scand J Gastroenterol  1996;31:985-992
10    Romagnani P, Annunziato F, Piccinni MP, Maggi E, Romagnani S. Th1/Th2 cells, their associated molecules and role
in pathophysiology. Eur Cytokine Netw  2000;11:510-511
11    Peterson JD, Herzenberg LA, Vasquez K, Waltenbaugh C. Glutathione levels in antigen-presenting cells modulate
Th1 versus Th2 response patterns. Proc Natl Acad Sci USA  1998;95:3071-3076
12    Murata Y, Ohteki T, Koyasu S, Hamuro J. IFN-gamma and pro-inflammatory cytokine production by
antigen-presenting cells is dictated by intracellular thiol redox status regulated by oxygen tension. Eur J
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13    Jeannin P, Delneste Y, Aubry JP, Lecoanet-Henchoz S, Gauchat JF, Life P, Bonnefoy JY. Thiols decrease human
IL-4 production and IL-4-induced immunoglobulin synthesis. Int Arch Allergy Immunol  1997;113:329-330
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Abcam品牌代理商

Abcam品牌代理商–上海金畔
1. Abcam品牌介绍
Abcam 位于英国的剑桥科学园,成立于1998年,专门生产和分销研究型抗体。我们的在线目录 (www.abcam.cn) 已有超过120,000 种抗体和试剂,并不断添加,供应予全球百多个国家。Abcam 于2005年11月在伦敦证券交易所上市,在美国、日本、香港、中国均设有分公司。
2. Abcam重点产品
生产和分销研究型抗体
3. Abcam官网
www.abcom.com
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BioVendor品牌代理商

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1. BioVendor品牌介绍
BioVendor 是欧洲的一家医药科技公司,专注于为分子和细胞学实验室提供体外研究产品,主要产品有重组蛋白、抗体和 ELISA 试剂盒。目前公司致力于有关激素和细胞活素利用方面的研究
,产品相关方向:能量代谢和体重调节、骨代谢、心血管疾病和肾病、感染和发炎、铁代谢研究、肌肉生长控制、神经组织损坏标记、肿瘤学、胰腺调节分子、分泌型磷脂酶 A2等。
2. BioVendor重点产品
重组蛋白、抗体和 ELISA 试剂盒
3. BioVendor官网
http://www.biovendor.com
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Bio-rad品牌代理商–上海金畔
1. Bio-rad品牌介绍
美国伯乐BIO-RAD公司公司总部设在美国加里福尼亚州的Hercules,在全球有30多家全资子公司,服务于全球超过85,000家科研院所,生物技术和制药公司,和临床实验室。
BIO-RAD公司自1952年成立以来,在50多年中为临床诊断和生命科学研究市场提供了广泛的新型产品和服务,始终居于科学发现的中心地位。 BIO-RAD公司 现今利用多种技术制造并
生产了几千种产品,这些技术包括蛋白质组学、生物信息学、电泳、成像、免疫测定、层析、微生物学和基因转移。根据产品的不同,BIO-RAD公司公司下设三大部门,它们是生命科学部,临
床诊断部和工业材料部,产品种类达6000余种。BIO-RAD公司主要产品有蛋白组研究产品、层析仪与填料、蛋白质和核酸电泳产品、基因枪与电穿孔仪、定量基因扩增仪、图像分析系统、激光
共聚焦扫描显微镜、酶标仪和洗板机系列、食品检测仪器与试剂、糖化血红蛋白检测系列产品、质控系统、毒物检测产品、血液病毒检测产品等。
2. Bio-rad重点产品
生命科学试剂
临床诊断试剂
3. Bio-rad官网
www.bio-rad.com
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硫酸葡聚糖 Dextran Sulfate (DSS) - 肠炎模式动物造模试剂

硫酸葡聚糖 Dextran Sulfate (DSS) - 肠炎模式动物造模试剂
溃疡性结肠炎(UC)是一种病因和发病机制尚不十分清楚的慢性肠道炎症性疾病,建立适当的结肠炎动物模型对于研究UC的病因、发病机制以及新的治疗方法具有重要意义。人们制作了多种动物模型对其进行研究,日本学者于1985年首次应用硫酸葡聚糖制备了鼠UC模型,此后,该方法广泛用于筛选治疗炎症性肠病(IBD)的新方法和临床前新药物的开发,也用于研究IBD的发病机制。其具备以下优点:
1.DSS诱导的UC模型的病理改变与人类UC最相似;
2.此模型既可以应用于UC急性期又可应用于慢性期的研究,使实验能够完整地进行;
3.制作简便、经济、易于复制。
参考方法:
方法一:
小鼠给予含50g/L硫酸葡聚糖(葡聚糖硫酸钠)5000或40000的蒸馏水自由饮用7d,出现体重减轻、腹泻、血便等急性肠炎的表现.病理学切片HE染色发现小鼠病变结肠腺体结构紊乱,黏膜和黏膜下单核细胞和多核细胞浸润.DSS组病变肠段组织GSH表达较对照组明显减少(2±0.6 vs 3.14±1.0,t = 3.95, P = 0.01<0.05),病变结肠分泌的IL-4明显升高(38.7±4.7 vs 28.7±6.7,t = 3.16, P = 0.009<0.01),IFN-g轻度降低(P>0.05).
资料来源:《GSH在DSS诱导的小鼠实验性肠炎中的作用》
方法二:
将分子量为50 00或40000的DSS溶于饮用水,配成3% DSS溶液,让BALB/C小鼠自由饮用7d,建立小鼠急性结肠炎模型;②让BALB/C小鼠自由饮用3% DSS溶液7d,然后饮用不含DSS蒸馏水14d,建立小鼠慢性结肠炎模型;模型建立成功的标志为饮用3% DSS 7 d后出现半稀便、腹泻、大便隐血(+)和肉眼血便中的任一症状。
资料来源:《葡聚糖硫酸钠致小鼠结肠炎模型的建立与评价》。
已有研究表明,不同分子量的DSS所诱导的病变特征不同,如用5000, 40,000和500,000的DSS喂养小鼠,结果典型病变只出现于5,000组和40,000组,50,000组的病变主要见于盲肠和上段结肠,此外,DSS结肠炎的严重度并不依赖于DSS摄入量,而是由DSS浓度决定,小鼠饮用的DSS量差别较小时不影响诱导出的结肠炎严重度。再次,不同种属对于不同分子量的DSS的敏感度不一。
相关试剂:
货号 英文名 中文名 分子量 其他
184005 Dextran Sulfate,Na 硫酸葡聚糖 5000 100g
184505 Dextran sulfate,Na 硫酸葡聚糖 36,000~50,000 100g
ACJ0380A Dextran sulphate sodium 硫酸葡聚糖钠 40000 100g、500g
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ChromaDex品牌代理商–上海金畔

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1. ChromaDex品牌介绍
Chromadex 公司于1999年在加拿大成立,主要生产植物化学/中草药对照品以及标准材料,是植物参考标准的创造以及植物化学物质的产品和服务的市场领导者, ChromaDex公司提供
多达3000种产品和试剂盒,满足了自然产品的参考标准品、材料、业务的需求。现在是仍然通过严谨的科学以顾客为中心发展参考标准品和业务。
Chromadex是一个生产天然产品的创新性的公司,提供专有的、科学性的溶剂和配料,它们可用于食品强化剂、食品和饮料、化妆品和制药行业。特别是,Chromadex 公司研发和销售植
物化学和植物学的参考标准品和材料。生产和销售新颖的和天然的对人类健康有积极影响的产品。凭着公司的专业的服务和严谨的科学给市场带去安全与高品质。为了满足市场对天然产品的
标准品、材料和服务不断增长的需求,Chromadex 公司在1999年应运而生。随着各种消费类产品的出现,越来越多的消费者和政府机构要求有质量保证的研究方法,
如今Chromadex公司采取以科学严谨性为支撑的消费者为中心的方式,在参考标准品这服务性行业中处于领先地位。它在市面上的专业技术赋予它独特的基础,使它可以结合科学健康的自
然力量去开发和销售天然和新颖的配料。
2. ChromaDex重点产品
植物化学/中草药对照品
3. ChromaDex官网
http://https://chromadex.com/default.aspx
4. 金畔生物代理ChromaDex品牌联系方式
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APSC品牌代理商

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1. APSC品牌介绍
APSC主要提供有机凝胶色谱标准品(Organic GPC/SEC Standards)和水性凝胶色谱标准品(Aqueous GPC/SEC Standards)两类产品。
GPC(Gel Permeation Chromatography),凝胶渗透色谱,又称为尺寸排阻色谱(Size Exclusion Chromatography,简称SEC),它是基于体积排阻的分离机理,通过具有分子筛性质的固定相,用来分离相对分子质量较小的物质,并且还可以分析分子体积不同、具有相同化学性质的高分子化合物。
GPC是一种特殊的液相色谱,所用仪器与高效液相色谱仪类似,GPC的分离是利用体积排除机理,装填的是多孔性凝胶或微粒,孔径大小与待分离的聚合物分子相似,体积大的高分子化合物不能进入凝胶孔,最先从凝胶粒间流出,淋出体积(时间)最小,高聚物依分子量从大到小依次淋出。这样,通过做已知分子量的高分子聚合物的标准曲线,就能分析同系未知待测高分子化合物了。
2. APSC重点产品
机凝胶色谱标准品(Organic GPC/SEC Standards)和水性凝胶色谱标准品(Aqueous GPC/SEC Standards)两类产品。
3. APSC官网
http://www.ampolymer.com/
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Abnova品牌代理商

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1. Abnova品牌介绍
Abnova是世界上最大的单克隆抗体生产商之一,现有抗体产品种类近10000种,其中2/3是单克隆抗体。和传统的单克隆抗体生产方法相比,Abnova采用更先进的技术和设备,可以极大地提高单克隆抗体的生产效率并降低其生产的成本。Abnova具有每个月开发500个小鼠单克隆抗体的能力,他们的目标是:人类基因组中的每一个表达基因都至少有一种抗体。
2. Abnova重点产品
单克隆抗体
3. Abnova官网
http://hamptonresearch.com/
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Fortis品牌代理商

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Fortis品牌介绍
Fortis公司于2005年成立,以柴郡为基地,来自有丰富的色谱开发及创新历史的爱尔兰西北部。Fortis旨在为HPLC市场提供创新的产品。Fortis致力于研发及生产最新的HPLC和UPLC色谱柱,
满足和超过客户需求的产品,为客户提供高标准的服务和支持。其提供的填料范围广,从UPLC1.7um到10um。产品包括:UPLC,RP、NP、HILIC 色谱柱。Fortis提供的色谱柱优化色谱分离的峰
形、柱效、稳定性和再现性。
1. Fortis重点产品
产品包括:UPLC,RP、NP、HILIC 色谱柱。Fortis提供的色谱柱优化色谱分离的峰形、柱效、稳定性和再现性。
3. Fortis官网
http://www.fortis-technologies.com
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DNA片段的连接技术

实验十三 DNA片段的连接技术
一、目的与原理
DNA酶切片段的联接是两DNA片段相邻的5‘磷酸和3’羟基间可有连接酶催化形成磷酸二酯键,这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)DNA连接酶和T4DNA连接酶催化,但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶,因该酶在正常条件下,即能完成连接反应。本实验拟通过T4DNA连接酶对酶切片断的连接操作,掌握这一DNA片段的连接技术。
二、材料和方法
1. 仪器
离心机,恒温设备,真空干燥机,取液器
2. 试剂
T4DNA连接酶,10×T4DNA连接酶缓冲液、200mM Tris-HCl(pH7.6)、50mM MgCl2、50mM DTT、500μg/ml牛血清白蛋白、5mM ATP、λDNA、酚,TE缓冲液,电泳缓冲液、3M NaAc
三、操作步骤
取干净、灭菌新Eppendorf管,按下表加入各试液
试液 体积(μl)
T4DNA连接酶缓冲液 1.5
λDNA 10
ATP 1
无菌水 1.5
连接酶 1
总体积 15
19–20℃ 保温2小时,提取已连接好的DNA片段。电泳分析。
四、结果 (略)
五、注意事项
1、 该实验用的T4DNA连接酶最适反应是37℃,但该温度下DNA退火效率低,连接效率还不如22℃高。
2、 如果要检验连接酶和连接酶专用的缓冲液是否有效,可重新连接酶切后的λDNA。若连接成功,则说明有效。
实验十四 受体菌感受态细胞的制备
一、目的与原理
当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时,即为感受态,而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。
二、材料和方法
1. 材料:大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2. 仪器:
离心机,恒温摇床,恒温水浴,超净工作台,冰柜
3. 试剂
LB培养基,0.1M MgCl2,3mM氯化六氮合高钴
TFB:10Mm MES(pH6.3)
45Mm MnCl2
10Mm CaCl2
10Mm KCl
三、操作步骤
大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)在LB培养基平板上划线培养12-16小时,挑取单菌落于LB培养基摇瓶培养大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)到对数期。取1ml培养物7000rpm,离心3min,收集菌体。再重复一次。冰浴放置。用预冷的氯化镁悬浮菌体7000rpm离心3min。收集菌体,冰浴放置。用预冷的氯化钙悬浮菌体,冰浴15min, 7000rpm离心3min。收集菌体,冰浴放置。加入200μl预冷的氯化钙(或TFB),放置于冰浴,即得感受态细胞,此细胞可现用,也可进行下步操作。将悬液分装于无菌离心管中,投入液氮,然后储于-70℃保存。
四、结果 (略)
五、注意事项
一般地,新制备的感受态细胞48h后转化效率降低,15d后失效。因此,感受态细胞不能保存太久,4℃保存一周,但-80℃可保存1年。用试管分装可避免反复冻熔,损伤感受态细胞。
实验十五 重组片段的转化及克隆和筛选
一、目的与原理
转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞,使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。
二、材料和方法
1.材料:大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2.仪器:
离心机,恒温摇床,恒温水浴,超净工作台,冰柜
3.试剂
LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ;
TFB:10mM MES(pH 6.3),45mM MnCl2, 10mM CaCl2, 100mM KCl
三、操作步骤
1. 感受态细胞融化(在手心)
2. 加入溶于TE的待转化外源DNA,冰浴30min。
3. 42℃热冲击2 min。
4. 冰上2min。
5. 加入0.4 ml LB液体培养基,37℃保温摇床45 min
6. 取0.2ml菌悬液涂布在含氨苄青霉素、IPTG、X-gal培养基上,37℃培养。
四、实验结果及分析:
培养皿上有白色菌落和兰 色菌落,但兰色菌落数量很少。由于受体细胞本身的菌落为兰色,所以白色菌落说明转化成功;兰色应为转化不成功。但是由于转化的质粒经过了酶切和连接,若是在原酶切位点的连接进行的转化,菌落为白色;若为酶切去一段DNA的的连接质粒进行的转化,菌落为兰色(说明在酶切上成功,连接上也成功,转化上也成功)。
五、注意事项
关键要严格控制热激时间,超过2min,则转化会失败。
免疫学实验
实验十六 单向琼脂扩散实验
一、原理
单向琼脂扩散实验又称单向免疫扩散实验。指可溶性抗原在相应抗体的琼脂介质中的扩散,可定性、定量抗原。
二、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,晾干后置于水平台,将1%琼脂糖融化,56℃水浴中保温。
2.取15ml琼脂糖加到56℃预热玻璃管中,加入约200微升抗血清,充分混匀后铺于玻璃板上,厚度约为1㎜。
3.待凝胶凝固后打孔,直径为3㎜,将孔内琼脂弄出。
4.将系列稀释的标准抗原和待检抗原分别加到凝胶孔内,每孔5微升。
将凝胶板置于湿盒内,室温过夜,观察结果。
三、实验结果
发现沉淀环的大小与抗原的浓度成反比,基本成线性相关。其大小不仅与孔中抗原的浓度相关,而且和琼脂中抗体的浓度有关。
实验十七 双向琼脂扩散实验
一、原理
双向琼脂扩散实验,是将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。两者相互扩散,当扩散到他们的浓度比例合适的部位相遇时,就会形成抗原抗体复合物的沉淀。
二、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,晾干后置于水平台,将1%琼脂糖融化,56℃水浴中保温。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上,厚度约为1㎜。
3.打孔,孔距为4㎜,
4.将抗血清按二倍稀释法稀释成1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32的不同浓度。
在周围孔中加入不同浓度的抗体,中心孔加抗原。
将凝胶板置于湿盒内,室温过夜,观察结果
三、实验结果
浓度不同,形成不同的沉淀的线。
实验十八 免疫电泳
一、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,晾干后置于水平台,将1%琼脂糖融化,56℃水浴中保温。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上,厚度约为1㎜。凝固后,打孔。
3.在孔内加入抗原,其中一孔内加电泳指示剂。
4.将凝胶板放在电泳槽中进行电泳,确定电泳时间。
5.电泳后在凝胶板上沿电泳方向平行挖2㎜宽的长槽,加入抗血清。
二、实验结果
将凝胶板放入湿盒,室温放置12小时,可观察在到沉淀弧线。
实验十九 对流免疫电泳
一、操作步骤
1.1%琼脂糖融化后,置于56℃备用。
2.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,凉干。
3.将琼脂糖铺于玻璃板上,厚度约为1㎜。凝固后,打孔。
4.在孔内分别加入抗原和抗体,每孔5微升,抗体点阳极,抗原点阴极。
5.在电场中电泳50min,5V。
二、实验结果
在小孔中间出现沉淀线。
实验二十 火箭免疫电泳
一、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,晾干后置于水平台。
3%琼脂糖融化后,置于56℃备用。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上,厚度约为1㎜。凝固后,打孔。
3.将抗原按倍比稀释,在孔内分别加入标准抗原和代测样品,每孔5微升。
在10V电场中电泳3小时。
二、实验结果
发现在电泳方向上有拖尾,拖尾长度与抗原浓度有关。
 

Cayman品牌代理商

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1. Cayman品牌介绍
Cayman公司成立于1980年,在过去20多年的发展过程中,始终保持着为全球科研工作者提供高质、优价研究产品的宗旨。该公司目前可以提供 2,138 多种生化和免疫试剂,涉及肿瘤、氧化
氮、神经学、凋亡、氧化性损伤、内分泌学等研究领域。非常有特色的检测试剂盒包括类花生酸类物质、游离的生物标志、环核苷、激素及氧化氮等。此外,还提供多种高质量试剂,如类花
生酸类物质、氧化氮试剂及许多相关脂质、脂肪酸、酶和抗体等。Cayman非常愿意接受各地客户的要求,合成复杂和不稳定分子。
2. Cayman重点产品
生化和免疫试剂
3. Cayman官网
http://www.caymanchem.com
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实验七 SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定

实验七 SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定

一、实验目的与原理
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现,如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合,即每克蛋白质结合1.4g的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷,它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量,因而消除了蛋白质原有的电荷差别,使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量,而与蛋白质所带的电荷无关,在一定条件下,蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。
本实验的目的是对多酚氧化酶的纯化度鉴定及分子量的测定,通过实验,学习和掌握SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法蛋白质纯度和分子量的鉴定。
二、仪器与试剂
1.材料:
硫酸铵盐析沉淀的多酚氧化酶粗酶样品、DEAE-纤维素DE52柱层析的样品,Sephadex G-100柱层析的样品。
2.试剂:
(1)丙稀酰胺(Acr母液):30%Acr (Acr/Bis)
(2)10%的SDS溶液
(3)10%的过硫酸铵溶液
(4)四甲基乙二胺(TEMED)
(5)分离胶缓冲液:1.5M Tris,PH8.8
(6)浓缩胶缓冲液:1.0M Tris,PH6.8
(7)电极缓冲液:10×30g Tris,125g 甘氨酸和5g SDS,加水溶解定容至1000ml,pH8.3
(8)样品缓冲液:0.2M Tris,PH6.8,1%SDS,30%甘油,巯基乙醇及溴酚兰
(9)染色液:0.15%考马斯亮蓝R250,溶于脱色液
(10)脱色液:50%的甲醇,7%的冰醋酸的水溶液
(11)标准分子量蛋白。
3.仪器设备:
电泳仪,垂直电泳槽等。
三、操作步骤
1, 凝胶制备:
用两块电泳玻璃板制成垂直板槽(不能漏胶),垂直放置。将配制好的分离胶溶液,倒入,滴加入无离子水,待凝胶聚集后,倒出无离子水,用吸水纸吸干,倒入浓缩胶,再插入梳子。
2, 上样:
分别取样品若干ml于离心管中,按1/1-1/5比例加入5×样品缓冲液,再沸水浴中加热3-5min,取出待用。用微量注射器分别吸取不超过30ul不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽。点样结束后,调节电泳仪电流到10mA(2-3mA/em),保持电流稳定不变,当溴酚蓝迁移到离分离胶底1-2cm时,即可停止电泳。
3, 染色:
电泳完毕后,取出凝胶板,浸入染色液中,在37℃温箱中保温过夜。倒掉染色液,24h后,即可看到清晰的蛋白质条带。
四、结果 (略)
五、注意事项
1、 SDS与蛋白质的结合按质量成比例(即:1.4gSDS/g蛋白质),如果比例不当,就不能得到准确的数据。
2、 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时,必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。
3、 有些蛋白质由亚基(如血红蛋白)或两条以上肽链(α-胰凝乳蛋白酶)组成的,它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此,对于这一类蛋白质,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。
4、 有的蛋白质(如:电荷异常或结构异常的蛋白质;带有较大辅基的蛋白质)不能采用该法测相对分子量。
5、 如果该电泳中出现拖尾、染色带的背景不清晰等现象,可能是SDS不纯引起。
实验八 Western bloting 技术
一、实验目的与原理
Western bloting技术是用来检测蛋白表达的特定的灵敏的方法,由蛋白质的SDS-PAGE、电转及杂交几部分组成。杂交技术主要有NC膜封闭,靶蛋白与第一抗体的反应,结合靶蛋白的一抗和二抗的反应,显色等组成。将凝胶上的蛋白质转移到NC膜上,用其他蛋白作为封闭液,将膜上余下的其他蛋白结合位点封闭,加入与检测蛋白特异性的第一抗体,经免疫反应,一抗与靶蛋白结合,经洗膜液洗涤后,膜上仅在靶蛋白上结合抗体。在加入与第一抗体有免疫特异性的二抗,使之与一抗反应,反应后,经洗膜液洗涤,二抗仅存在于结合靶蛋白的一抗上。因为这种二抗都为酶标抗体,通过酶标反应,在显色液中,膜上结合靶蛋白—一抗—二抗的位置即将呈现一定的颜色。
二、材料与方法
1.材料
从微生物细胞中提取的多酚氧化酶(PPO):10μl,20μl
NC膜:硝酸纤维素膜
2.仪器:
电转移槽,电泳仪,塑料封口机,摇床
3.试剂:
转移缓冲液:48Mm Tris,39mM甘氨酸,0.037%SDS同时加入20%乙醇。
封闭液与稀释液:PBS(牛血清白蛋白)
辣根过氧化物酶显色液:现配现用
三、操作步骤
1.SDS-PAGE电泳见上个实验
2.电转
⑴剪NC膜大小、滤纸与凝胶板一致,浸泡在转移缓冲液中5min。
⑵在转移装置中依次将三层滤纸、凝胶、滤纸、三层滤纸放在一起。
⑶将装好的转移装置放入电转移槽中NC膜一侧向正极,凝胶一面向负极。
⑷接通电源电压63V,电流90mA,转移过夜。
⑸转移结束后,取出装置,依次取掉各层,用铅笔在膜的上沿做标记,切下其中一个孔所对应膜的一半。
⑹NC膜的封闭:将NC膜放入一塑料袋中,加入封闭液3ml,封口,轻轻震荡2h。
⑺将封闭好的NC膜放入另一塑料袋中,加入用封闭液稀释的一抗,2.8ml,封口。4℃下轻摇2h。
⑻洗膜:弃去反应液,用一抗稀释液洗三次,每次10min。
将膜从PBS中取出转至150mM氯化钠,50mM Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min。
⑼将二抗用二抗稀释液稀释,将NC膜放入塑料袋中,加入二抗溶液2.8ml。封口,轻轻震荡1h。
⑽洗膜:取出膜转至150mM氯化钠,50mM Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min,三次。
⑾将膜放入显色液中,室温轻轻摇动,10min。
⑿待条带出现后,立刻用水洗膜,然后转入PBS中,观察记录。
实验九 等电聚焦电泳(IEF)分离蛋白及测定蛋白质等电点
一、原理
等电点聚焦(IEF)是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展,等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。
在电场中充有两性载体和抗对流介质,当加上电场后,由于两性载体移动的结果,在两极间逐步建立稳定的pH梯度,当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时,这种分子便会由于其表面电荷在此电场中运动,并最终达到一个使其表面静电荷为0的区带,这时的pH则是该分子的pI,聚焦在等电点的分子也会不断扩散,一旦偏离其等电点后,由于pH环境的改变,分子又立即得到正电荷或负电荷,从而又向pI迁移。因此,这些分子总会是处于不断扩散和抗扩散的平衡中,在pI处得以“聚焦”.
二、仪器与试剂
1.材料:蛋白样品
2.试剂:
聚丙烯酰胺、甲乙聚丙烯酰胺、两性电解质、尿素、NP-40、teiton-100
电极液:1M磷酸(阳极液)、1M氢氧化钠(阴极液)
固定液:100g三氯乙酸、10g磺基水杨酸溶于500ml,定容为1000ml
染色液:0.35g考马斯亮蓝R-150溶于300ml脱色液中,加热到60-70℃,加入0.3g硫酸铜。
脱色液:25%乙醇、8%冰乙酸溶于水
样品缓冲液:1%Ampholine 、2%Triton X-100、9M尿素
三、操作步骤:
1, 样品制备:
用IEF样品缓冲液提取待分析样品,如其他缓冲液提取的样品则应透析后,冷冻干燥、再复溶于IEF样品缓冲液。充分溶解后,离心去除不溶杂质。
2,制模具:
洗干净两块IEF专用玻璃板,进行硅化和反硅化处理,两块玻璃板的硅化和反硅化面相对,放上夹条,夹子夹好。
3, 配胶:
胶液组成:6ml胶母液(10%,19/1)
6-8%尿素
1ml Ampholine (pH3.5-10)
60-80ul 10%AP
5 ul TEMED
4, 灌胶:配好的胶迅速灌入模具
5, 电泳:
等胶凝固后,小心揭去上下玻璃板,将塑料垫片底部擦干,小心放于电泳槽上。在胶面两边各放一根浸透电极缓冲液的电极条。在胶面上任意位置上放上小擦镜纸片,在纸片上加样,盖上盖子,横功率25W电泳,约10min后,暂停电泳,取下纸片,继续电泳约30min,待电流达4mA以下,停止电泳。
6, 表面电极测定蛋白质的pI
7, 固定:取出塑料片,放入固定液中15min
8, 染色:取出塑料片放入染色液中65℃染色,直至条带出现
9, 可脱色至背景消除后干燥保存。
四、结果 (略)
五、注意事项
1、 两性电解质是等电聚焦的关键试剂,它的含量2﹪-3﹪较合适,能形成较好的pH梯度。
2、 丙烯酰胺最好是经过重结晶的。
3、 过硫酸铵一定要新配置。
4、 所有水用重蒸水。
5、 样品必须无离子,否则电泳时样品带可能走歪,拖带或根本不成带。
6、 平板等电聚焦电泳的胶很薄,当电流稳定在8mA,电压上升到550V 以上,由于阴极飘移,造成局部电流过大,胶承受不了而被烧断。
核酸技术
实验十 染色体DNA的提取
一、实验目的与原理
DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息(bioinformation)(bioinformation)(bioinformation)(bioinformation)分子,是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织,通过裂解液裂解细胞,有机溶剂反复抽提,使DNA进入水相与蛋白质成分分开,在RNase作用下,降解RNA以纯化DNA。
二、材料以方法
1、 材料:培养菌体
2、 仪器设备:超净工作台,培养箱,摇床,恒温水浴锅,高速冷冻离心机,台式离心机,移液枪一套,低温冰箱,冷冻真空干燥机,电泳仪,水平电泳槽,紫外观测仪
3、 试剂:
细胞裂解液 100 mM Tris-HCl
5 mM EDTA
500 mM NaCl
1.25% SDS
PH 7.5
饱和酚,氯仿/异戊醇,酚/氯仿/异戊醇
无水乙醇,70%乙醇,异丙醇
3 M NaAc pH5.2, RNase,50×TE缓冲液,电泳载样缓冲液
三、操作步骤
(1) 培养菌体
(2) 加入10 ml裂解液,1/10体积酚,于65℃下20-30 min,然后加入等体积的氯仿,轻摇
(3) 12000-15000rpm离心15 min
(4) 取上淸液,加入等体积氯仿,轻摇,12000-15000rpm离心15 min
(5) 取上淸液,加入0.6倍体积冷异丙醇(-20℃)或2倍体积冷无水乙醇(-20℃)
(6) 加入1/10体积的3 M NaAc(pH5.2),置于室温下10 min
(7) 12000-15000rpm离心10 min
(8) 倒弃液体留下沉淀,用70%乙醇洗涤沉淀
(9) 加入2倍体积无水乙醇
(10) 12000-15000rpm离心10 min
(11) 倒弃液体留下沉淀,真空干燥
(12) 复溶于2 ml TE
(13) 加入RNase,65℃或37℃处理10-30 min
(14) 加等体积酚,酚/氯仿,氯仿各一次,12000-15000rpm离心10 min
(15) 取上淸液,加入0.6倍体积冷异丙醇(-20℃)或2倍体积冷无水乙醇(-20℃)
(16) 加入1/10体积的3 M NaAc(PH5.2),置于室温下10 min
(17) 12000-15000rpm离心10 min
(18) 倒弃液体留下沉淀,用70%乙醇洗涤沉淀
(19) 真空干燥沉淀
(20) 复溶于0.5-1.0 ml的TE或水中,分装成小体积,4℃或-20℃保存。
(21) 电泳检测提取DNA的质量
四、结果与分析
点样空,若发亮则说明有污染
超螺旋结构DNA,若条带有拖尾则
说明有破碎的DNA
少量未清除的RNA
五、注意事项
1、 重点防止DNA的损伤,包括各种物理、化学和机械损伤。
2、 干燥好的染色体DNA最好溶于去离子水,以备后面直接利用。如果用TE 缓冲液溶解,后面还需去离子。
3、 取上清时,如果上清液过少,可再加入少量水,重新离心,取上清,避免DNA损失过多。
实验十一 质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理
质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步:①细菌的培养和质粒的扩增,②细菌菌体的裂解,③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方法为碱解法,质粒纯化方法为梯度离心法。
二、材料与试剂
1、材料:大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2、仪器:超净工作台,培养箱,摇床,恒温水浴锅,台式离心机,取液器一套,低温冰箱,冷冻真空干燥机,电泳仪,水平电泳槽,紫外观测仪
3、试剂:
Solution I 25 mM Tris-Hcl(pH7.4)
10 mM EDTA(pH8.0)
50 mM葡萄糖
高压灭菌,4℃保存
Solution II 0.2 M NaOH, 1%SDS 现配现用
Solution III 5 N KAc pH4.8
高压灭菌,4℃保存
3 M NaAc PH5.2, 高压灭菌,4℃保存。异丙醇,溶菌酶(8 mg/ml),酚/氯仿,无水乙醇,70%乙醇,LB培养基,电泳试剂
三、操作步骤
1、细菌繁殖
LB培养基,2 ml/20ml,37℃,200rpm,摇一摇,过夜
2、离心10 min,5000 rpm, 4℃;弃上淸液
3、沉淀(菌体细胞)预冷的TES缓冲液洗涤,离心10 min,5000 rpm, 4℃
加入预冷的1 ml Solution I,冰浴,10 min
4、重新悬浮,加入150 ul溶菌酶母液,室温放置5 min
5、加入1.2 ml Solution II, 冰浴,5 min
6、加入0.9 ml预冷乙酸钾,混匀,离心10 min,12000 rpm, 4℃
7、加入1.5 ml异丙醇,-20℃冰箱内放置15 min
8、离心10 min,12000 rpm, 4℃
9、取沉淀,悬于400 ul TE缓冲液中
10、加入40 ul,3 M NaAc
11、酚/氯仿,抽提,乙醇沉淀
12、离心10 min,12000 rpm, 4℃
13、取沉淀,冷冻干燥,再悬浮于50 ul TE缓冲液中。
14、电泳检测提取DNA的质量
三、结果与分析
超螺旋结构DNA
四、注意事项
在本实验中,如果不经过RNase处理,在电泳带中,RNA会呈现极亮的带,所以,建议使用RNase处理一下。离心时应注意转速不能太低,太低会导致质粒不纯;也不要太高,否则质粒不易溶解。电泳时应注意电压,电压太高或混有蛋白质杂质时电泳带容易产生偏离和拖尾。在DNA操作中应尽可能轻地操作(尤其是分别加入溶液Ⅱ、溶液Ⅲ轻轻摇),否则质粒容易断裂,从而在观察条带时出现许多杂带。无水乙醇可用于沉淀质粒,如果质粒量比较大的话,一般用异丙醇来沉淀。
实验十二 亚克隆技术
一、目的与原理
限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶,该类酶是体外剪切基因片段的重要工具。实验主要通过EcoR Ⅰ,Hind Ⅲ两种限制性内切酶对λ DNA的单切酶、双切酶及部分酶切的操作,掌握内切酶的实验操作技术。
二、材料与试剂
1.材料:λDNA
2.仪器:
离心机,恒温水浴,取液器,电泳仪,电泳槽,紫外观测仪
3.试剂
EcoRI及缓冲液,HindIII及缓冲液,λDNA,TAE缓冲液
三、操作步骤:
EcoRI、HindIII单酶切及部分酶切
取2只干净、灭菌新Eppendorf管,分别按下表加入
试剂 A(μl)
灭菌水 0
10×缓冲液 2
质粒 5
染色体DNA 12
EcoR I
1
HindIII
总体积 20
37℃保温1—2小时。保温结束后,分别加入0.5M(pH8.0)EDTA(使终浓度达到10mM)。加入6μl电泳加样缓冲液。
电泳。
EcoRI、HindIII双酶切
取1只干净、灭菌新Eppendorf管,按下表
加入试剂 体积(μl)
灭菌水 14
10×缓冲液 2
λDNA 2
EcoR I
1
HindIII
1
总体积 20
37℃保温1—2小时。保温结束后,分别加入0.5M( pH7.2)EDTA(使终浓度达到10mM)。加入6μl电泳加样缓冲液。电泳分析。
四、结果 (略)
五、注意事项
1、 酶的量不超过总体积的1﹪,以为酶的保存液中含有甘油,甘油太多会形成星活性,切下非目的片段。
2、 在加入模板DNA以前可加入少量BSA,减轻管壁对酶的吸附作用。
3、 如果用双酶切,必须注意分别提供各自的最适盐浓度。若两者可以用同种缓冲液,则可同时水解,否则低盐浓度的限制酶必须先用,随着调节盐浓度,再用高盐浓度的限制酶水解。也可在第一个酶切反应完成后,用等体积酚/氯仿(1:1)抽提,加0.1倍体积的3mol/LnaAc和2倍体积的无水乙醇,混匀后-20℃放置30分钟,离心,干燥并重新溶于缓冲液后进行第二个酶切反应。