α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测试剂盒BC0710
产品名称:α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测试剂盒
产品型号:BC0710
产品特点:α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测试剂盒测定意义:α-KGDH(EC1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。
BC0710α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测试剂盒的详细资料:
α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测试剂盒
产品名称:: α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测试剂盒
产品英文名: αKetoglutarate Dehydrogenase(α-KGDH) Assay Kit
产品货号:BC0710 产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼
产品规格:50管/48样 产品商标:Jinpan
保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:1300
库存状态:现货
关键字:: α酮戊二酸脱氢酶检测试剂盒|α-KGDH检测试剂盒|α酮戊二酸脱氢酶|试剂盒
简要介绍:
α-KGDH(EC1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和NADH,NADH在340nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。
产品详细描述
产品内容:
试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体0.6mL×1支,-20℃保存;
试剂三:液体55mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1支,4℃保存;
试剂五:粉剂×1支,4℃保存;
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;
试剂七:粉剂×1支,-20℃保存;
试剂八:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加入2mL双蒸水充分混匀待用,用不完的试剂仍-20℃保存。
工作液的配制:临用前把试剂四、试剂五、试剂六、试剂七转移到试剂三中混合溶解待用。
产品说明:
α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。
试验所需自备仪器和样品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、α-KGDH的提取
称取约0.1g组织或收集约500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂二,冰浴用匀浆器或研钵充分研磨,4 ℃ 11000 g离心10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上,调节波长到340 nm,蒸馏水调零
2. 空白管:
取1mL工作液加入1mL石英比色皿,37℃孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL试剂八和60μL蒸馏水,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A1,37℃准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A2,计算ΔA空白=A2-A1。
3.测定管:
取1mL工作液加入1mL石英比色皿,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL试剂八和60μL样本,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A3,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)中准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A4,计算ΔA测定=A4-A3。
三、α-KGDH活性计算
1.按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T
=1473.7×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr
2.按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
α-KGDH(U/g 鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W)÷T
=1488.5×(ΔA测定-ΔA空白)÷W
3. 按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
α-KGDH活性(U/104cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500) ÷T
=2.977×(ΔA测定-ΔA空白)
V反总:反应体系总体积,1.1×10-3 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.06mL;V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
注意事项:
1、测定过程中所有试剂和样本在冰上放置,以免变性和失活。
2、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃,取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水,将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
3、两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。
4、测定管的ΔA值在0.01-0.25之间,若测定管的ΔA值大于0.25,需将样本进行稀释。
相关文献:
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