农杆菌电击感受态;规格:50ul*10支 ;保存:-80℃
中文名称:GV3101电击感受态细胞
规格:0.1ml*10支
用途:生化试剂。(用于科研试验研究)
保存:-80℃
基因型
C58(rifR)TipMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline
产品说明
GV3101菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90(pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90(pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签:Strep和gent,赋予GV3101菌株链霉素和庆大霉素抗性,适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。GV3101电转感受态特别适用于大质粒的转化:经pCAMBIA2301质粒(size:11633bp)检测转化效率可达5×104cfu/μg;经pCAMBIA2301-ZH质粒(size:40kd)检测转化效率可达5×103cfu/μg。
操作方法
1.0.2cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
2.取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入1-5ug质粒DNA(质粒体积不大于6ul,最好用试剂盒抽提,双蒸水溶解),用手拨打管底混匀,立即插入冰中,用200ul枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。
3.启动电转仪,设置参数:C=25uF,PC=200ohm,V=2400V(此参数为Biorad推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中,加入700ul无抗生素的LB并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。
4.6000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50ug/mlk时,28℃培养48h即可;平板中同时加入50ug/mlk,20ug/mlrif时,需28℃培养60h;如果使用的平板含有50ug/mlrif则需要28℃培养72-90h)。
注意事项
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
1、农杆菌相关抗生素配方:
抗生素 |
配方 |
原液浓度 |
工作浓度 |
羧苄青霉素 (carb) |
双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 |
50 mg/ml |
50 μg/ml |
硫酸卡那霉素 (k) |
双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 |
50 mg/ml |
50 μg/ml |
链霉素 (strep) |
双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 |
10 mg/ml |
50 μg/ml |
利福平 (rif) |
DMSO溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 |
10 mg/ml |
20 μg/ml |
庆大霉素 (gent) |
双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 |
20 mg/ml |
40 μg/ml |
2、常用农杆菌抗性: (R:抗;S:敏感。)
农杆菌菌株 |
羧苄青霉素(carb) |
链霉素(strep) |
利福平(rif) |
庆大霉素(gent) |
硫酸卡那霉素(k) |
AGL-1 |
R |
R |
R |
S |
S |
EHA101 |
S |
R |
R |
S |
R |
EHA105 |
S |
R |
R |
S |
S |
LBA4404 |
S |
R |
R |
S |
S |
GV3101 |
S |
R |
R |
R |
S |
3、LB及YEB配方:
component |
LB(液体)/L |
LB(固体)/L |
component |
YEB(液体)/L |
YEB(固体)/L |
Tryptone |
10 g |
10 g |
Tryptone |
5 g |
5 g |
Yeast extract |
5 g |
5 g |
Yeast extract |
1 g |
1 g |
NaCl |
10 g |
10 g |
牛肉浸膏 |
5 g |
5 g |
NaOH |
调PH到7.0 |
调PH到7.0 |
蔗糖 |
5 g |
5 g |
Agar |
- |
15 g |
MgSO4*7H2O |
0.49 g |
0.49 g |
|
|
|
NaOH |
调PH到7.0 |
调PH到7.0 |
|
|
|
Agar |
- |
15 g |
参数信息 | |
---|---|
外观状态: | 固体或粉末 |
质量指标: | 95%+ |
溶解条件: | 有机溶剂/水 |
CAS号: | N/A |
分子量: | N/A |
储存条件: | -20℃避光保存 |
储存时间: | 1年 |
运输条件: | 室温2周 |
生产厂家: | 上海金畔生物科技有限公司 |