基因型  

F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcmaraB::T7RNAP-tetA  

产品说明  

High5TM系列BL21(AI)感受态细胞是大肠杆菌B/r型菌株(E.coliB/r)，BL21(AI)来源于BL21菌株，为膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株。该酶的缺失能够有效防止表达的异源目的蛋白在细菌体内的降解。使用L-阿拉伯糖诱导araBAD启动子下游的蛋白表达。使用葡萄糖可以抑制araBAD启动子下游的蛋白表达。BL21(AI)感受态细胞适用于任何以T7启动子为基础的表达载体，能够进行高水平的重组蛋白表达。因为菌株体内的T7RNA聚合酶水平能够进行有效调节，BL21(AI)感受态细胞能够有效表达对其他BL21细胞有毒或生长抑制的蛋白。从BL21(AI)菌株中获得目的重组蛋白产量，和其他BL21菌株产量相当。BL21(AI)感受态细胞由特殊工艺制作经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。  

操作方法  

1.取100μl冰上融化的BL21(AI)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。  

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含50µg/ml四环素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。  

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。  

注意：  

1.BriCaliendo(Voigt实验室)报道过pCP20质粒比较难于转化到这个感受态细胞中，而pCP20转化到其他菌株中都很正常，但是菌体原因未知。  

2.即使不加葡萄糖，BL21(AI)细胞的araBAD启动子下游的本底蛋白表达水平仍然很低，加入葡萄糖后能够进一步的降低本底蛋白的表达水平。  

注意事项  

1.感受态细胞最好在冰上融化。  

2.混入质粒时应轻柔操作。  

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。  

4.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。  

5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。  

建议选择该菌株进行蛋白表达的条件如下：  

1.使用T7启动子载体（高拷贝或者低拷贝都可以）进行蛋白表达。  

2.使用其他BL21进行蛋白表达时，观察到明显的细菌生长的抑制作用。  

3.表达一个已知的毒性蛋白。