一、概述

肝素琼脂糖磁珠（Magarose-Heparin）具快速磁响应性、丰富的肝素密度、极高的物理化学稳定性等特点。一方面，可作为亲和介质的配基，与生长因子及抗凝血酶AT Ⅲ等生物分子发生特异性结合；另一方面，由于表面带有大量负电性硫酸根离子基团，可作为一种阳离子交换介质，在一定pH条件下，与带正电的蛋白具有强的结合能力。对于熟练的操作者，在短时间内就能完成高纯度目的蛋白的提取，能轻松实现多样品的平行处理，实现高通量的蛋白纯化。适用于抗凝血因子III、凝血因子、核酸结合蛋白、脂蛋白、干扰素、类固醇受体、凝血酶及类凝血酶等生物大分子的纯化。

二、产品特性

三、使用方法

1. 产品优势

   丰富的结合位点，加强了与配体的特异性结合；

   磁响应速度快，减少操作时间；

   磁珠具良好分散性和重悬性，提高操作的便捷性；

   配基具有良好的物理化学稳定性，提高了实验结果的可靠性及可重复性；

2. 操作流程（以纯化人血浆中抗凝血酶 Ⅲ为例）
3. 样品处理：取人血浆1 mL加入至1.5 mL EP管中，接着加入500 μL Binding Buffer（50 mM Tris-HCl, pH 8.0），充分混匀。
4. 磁珠预处理：将磁珠充分重悬；取400 μL 25%（v/v）磁珠悬液置于另一新的1.5 mL EP管。磁分离弃上清，用1 mL Binding Buffer洗涤2次，磁分离，管中磁珠可直接用于抗体分离。
5. 蛋白吸附：在步骤2预处理的磁珠管中加入步骤1处理的样品溶液，漩涡振荡均匀，在室温下（约25°C）将EP管置于垂直混合仪混匀15~30 min，使样品和磁珠充分接触并吸附，然后进行磁性分离，移弃上清液。
6. 磁珠洗涤：向EP管加入1mL Binding Buffer，重悬磁珠1 min后磁分离，移弃上清；该操作重复3次。

注意事项：根据洗脱蛋白SDS-PAGE图谱，在Binding Buffer中适当加入一定浓度NaCl，可有效去除非特异性吸附蛋白，使操作者获得更高浓度目标蛋白。

5. 蛋白洗脱：在上述EP管中加入0.2 mL Elution Buffer （50 mM Tris-HCl, 1~2 M NaCl, pH 8.0），重悬磁珠，室温下（约25°C）将EP管置于垂直混合仪混匀10~15 min后，磁分离，收集上清至新的EP管。
6. 磁珠再生：向EP管中加入1 mL纯水，重悬磁珠后磁分离，移弃上清，重复操作3次；接着改用Binding Buffer洗涤磁珠3次。磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上，为保证磁珠的使用效率，建议进行在位清洗（CIP）。
7. 在位清洗（CIP）：采用0.1M NaOH、8 M 尿素、纯化水、Binding Buffer依次洗磁珠2次；最后加入400 μL Storage Buffer(20%乙醇)重悬磁珠，2~8°C保存。