Protein A Berpharose FF
重组蛋白A琼脂糖凝胶FF(Protein A Berpharose FF)亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质,以重组蛋白A(rProtein A)为配基,具有很高的物理化学稳定性,配基不易脱落,寿命长,使用方便,应用广泛。蛋白A(Protein A)能特异性地与抗体IgG分子的Fc区结合,所以Protein A亲和介质可用于抗体(单抗和多抗)的分离纯化,经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。
2.规格
1ml(预装柱)、5ml(预装柱)、10ml(预装柱)、25ml、100ml、500ml、1L
3.产品性能
性能 |
指标 |
基质 |
4%琼脂糖微球 |
配基 |
重组蛋白A |
配基密度 |
>6mg/ml |
载量 |
≥35mg人IgG /ml |
粒径 |
45-165μm |
最大耐压 |
0.3Mpa |
推荐流速 |
50-300 cm/h |
pH稳定范围-工作/清洗 |
3~9/3~10 |
储存缓冲液 |
20%乙醇 |
储存温度 |
4-8℃ |
4. IgG与蛋白AG结合强度比较
种类 |
亚类 |
蛋白A |
蛋白G |
蛋白A蛋白G融合蛋白 |
人 |
IgG1 |
+++ |
+++ |
+++ |
IgG2 |
+++ |
+++ |
+++ |
|
IgG3 |
+ |
+++ |
+++ |
|
IgG4 |
+++ |
+++ |
+++ |
|
IgM |
+ |
– |
+ |
|
IgD |
– |
– |
– |
|
IgA |
+ |
– |
+ |
|
Fab |
+ |
+ |
+ |
|
兔 |
IgG |
+++ |
++ |
+++ |
山羊 |
IgG1 |
+ |
+++ |
+++ |
IgG2 |
+++ |
+++ |
+++ |
|
牛 |
IgG1 |
+ |
+++ |
+++ |
IgG2 |
+++ |
+++ |
+++ |
|
小鼠 |
IgG1 |
+ |
+++ |
++ |
IgG2a |
+++ |
+++ |
+++ |
|
IgG2b |
+++ |
+++ |
+++ |
|
IgG3 |
++ |
+++ |
+++ |
|
IgM |
– |
– |
– |
|
大鼠 |
IgG1 |
+ |
++ |
++ |
IgG2a |
– |
+++ |
+++ |
|
IgG2b |
– |
+ |
+ |
|
IgG2c |
+++ |
+++ |
+++ |
|
猪 |
IgG |
+++ |
++ |
+++ |
犬 |
IgG |
+++ |
+ |
+++ |
鸡 |
IgY |
– |
– |
– |
马 |
IgG(ab) |
+ |
++ |
+ |
IgG(c) |
+ |
++ |
+ |
5.纯化流程
应用举例:
结合缓冲液:20 mM磷酸缓冲液,150 mM NaCl,pH 7.0
洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,PH3.0或0.1M柠檬酸缓冲液,pH 4.0
中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 8.5
1) 1 ml重组蛋白A琼脂糖凝胶预填柱用5-10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液。
2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡5-10个柱床体积。
3)将5 ml人多抗血清用结合缓冲液稀释到50ml,0.45μm滤膜过滤上样。
4)用结合缓冲液再洗5-10个柱床体积。
5)用洗脱缓冲液洗脱抗体,收集洗脱峰,并用中和缓冲液调节其pH至中性。
6)每次使用后依次使用3个柱体积的结合缓冲液,5个柱体积的去离子水,5个柱体积的20%的乙醇平衡保存,防止填料被细菌污染。
7) SDS-PAGE电泳分析。
6.注意事项:
1)样品洗脱后一般pH很低,应立刻用碱性中和缓冲液(如1MTris-HCl,pH8.5)将收集到的抗体溶液中和到中性,或在收集容器中事先装5-10%、pH7.5的缓冲液(如1MTris-HCl或1M磷酸缓冲液),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。
2)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果。
3)填料再生清洗:随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,严重影响纯化效果,这时需要对填料进行再生清洗(如下步骤)
去除沉淀或变性物质:用2倍柱体积的6M盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
去除疏水性吸附造成的非特异性吸附物质:用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™X-100清洗,然后然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗
4)本产品保存条件:20%乙醇,4~8℃。
参数信息 | |
---|---|
外观状态: | 固体或粉末 |
质量指标: | 95%+ |
溶解条件: | 有机溶剂/水 |
CAS号: | N/A |
分子量: | N/A |
储存条件: | -20℃避光保存 |
储存时间: | 1年 |
运输条件: | 室温2周 |
生产厂家: | 上海金畔生物科技有限公司 |