NHS活化琼脂糖凝胶FF NHS Berpharose FF 亲和层析柱介质填料

NHS活化琼脂糖凝胶FF NHS Berpharose FF 亲和层析柱介质填料

NHS activated-Berpharose FF

产品介绍

1.      产品介绍

NHS-琼脂糖凝胶FF是一种将琼脂糖凝胶微球用NHS活化形成的生物亲和层析分离

介质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构,同生物活性大分子有很好的相容性,具有载量高、非特异性吸附少和流速快等特点。本活化的琼脂糖凝胶能温和地同氨基基团反应,特别适合偶联抗体、链霉亲和素、酶和核酸等功能性生物大分子。

2.规格

1ml、10ml、100ml、500ml

3.产品性能

性能

指标

基质

6%琼脂糖微球

配体

NHS

配体密度

25μmol/ml

载量

≥10mg目的蛋白/ml

粒径

45~165μm

推荐流速/最大流速

50~100/700 cm/h

耐反压

0.3MPa

工作温度

4~40℃

pH稳定范围:长时间/短时间

3~12/2~14

储存缓冲液

100%异丙醇

储存温度

-20℃

有效期

1年,密封保存2年

4.使用方法

应用举例:

NHS-琼脂糖凝胶FF偶联抗体

①配制抗体:取100 mg IgG用10 ml偶联缓冲液(0.2 M NaHCO3,0.5 M NaCl,pH8.3)溶解。

②偶联反应:取10 ml NHS-琼脂糖凝胶FF,用50 ml的1 mM HCl分三次清洗去除保存液,之后立即加入到抗体偶联溶液中,4℃振荡偶联6 h或者偶联过夜。

③封闭:上述溶液过滤,用50 ml偶联缓冲液清洗偶联后的凝胶,用10 ml封闭缓冲液(0.2 M NaHCO3,0.5 M NaCl,0.5 M乙醇胺,pH8.3)于室温振荡4 h(或者过夜)以封闭未偶联的基团,之后用20 ml蒸馏水清洗干净即可。

④检测:用SDS-PAGE检测偶联前后的反应液并计算偶联效率,偶联好的填料根基特性测定功能和载量。

 

5.注意事项:

1)偶联缓冲液可以是碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液,但绝对不能使用氨基缓冲体系(如Tris-HCl缓冲液)。

2)稳定的配基可以直接溶于0.2 M NaHCO3,可适当提高偶联温度(如室温)将偶联时间缩短至1~2 h。

3)如对配基的稳定性不够了解,可以选择不同pH值缓冲液和不同温度,用0.5~1 ml配基相应浓度的溶液,在无填料的条件下模拟偶联反应,观察溶液是否会产生沉淀。有沉淀产生说明偶联效果不佳,可适当降低缓冲液pH值或温度。同时可以添加约5%的甘油或PEG保护蛋白,避免产生沉淀。

4)根据偶联蛋白的稳定性选择合适的偶联pH值和温度。偶联较适pH值为pH7.5~9.0,室温或4℃均可。提高偶联温度能够提高配基的偶联效率。

5)偶联蛋白溶液的浓度以5~15 mg/ml为佳。偶联凝胶体积和配基溶液的体积比以1:0.5~1:2.0为佳。

6)如果偶联的配基不稳定,可于4℃振荡偶联1~12 h以维持配基的活性。偶联配基后应尽快清洗填料,避免配基在高pH条件下失活。

7)封闭缓冲液一般使用带氨基的小分子试剂,如乙醇胺、Tris等。于pH8~9、室温条件下封闭数小时可完全封闭。推荐封闭缓冲液:0.5 M乙醇胺,0.5 M NaCl,pH8.3或0.1 M Tris-HCl,pH8.5。

8)偶联中尽量使用温和的混匀方式,如振荡、翻转和旋转等,如使用磁力搅拌器或者机械搅拌,需要降低搅拌速度,使填料能够混匀完全悬浮即可,避免剧烈搅拌导致凝胶微球破碎。

9)NHS-琼脂糖凝胶FF需现取现用,避免取出后放置时间过长导致活性降低。

10)仅供科研实验使用

 

参数信息
外观状态: 固体或粉末
质量指标: 95%+
溶解条件: 有机溶剂/水
CAS号: N/A
分子量: N/A
储存条件: -20℃避光保存
储存时间: 1年
运输条件: 室温2周
生产厂家: 上海金畔生物科技有限公司