这种酶通过与泛素形成高能硫酯键，负责泛素-蛋白质-异肽键形成的第一步。泛素是通过首先用ATP对其C端甘氨酸残基（Gly76）进行腺苷酸化，然后将该残基连接到UBE1中半胱氨酸残基的侧链，产生泛素-UBE1硫醚和游离AMP和PPi。活化的泛素然后通过E2-E3接合级联转移到靶蛋白的赖氨酸。UBE1是启动任何体外结合反应的关键成分。蛋白质在N端有标签。

使用我公司的UBE1能够将泛素催化形成泛素链（如下图）。