ScreenFect™ 通信 向HeLa细胞导入siRNA数据

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ScreenFect™ 通信 向HeLa细胞导入siRNA数据廉价的高性能基因导入试剂

ScreenFect  通信 向HeLa细胞导入siRNA数据

 

下面为大家介绍使用ScreenFect ™ siRNA向HeLa细胞导入siRNA数据的实验成果及逆转染(1-STEP)Protocol。

◆向HeLa细胞的逆转染例子(24孔培养板)

细胞的前期培养


1.     用适当的培养容器(T-75烧瓶),将HeLa细胞培养至半融合状态。

配制转染试剂


1.     准备两支1.5 mL灭菌试管。

2.     在其中一支试管里加入24.5 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。

3.     再往步骤2的试管里加入0.5 μL的ScreenFect ™ siRNA reagent,

        使全部容量达到25 μL。…溶液(A)

      (ScreenFect ™ siRNA reagent在使用前进行涡旋处理。)

4.     在另一支试管里加入24 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。

5.     再向步骤4的试管里加入1 μL的5μmol/L PIK3CB siRNA溶液(5 pmol)…溶液(B)

6.     将溶液(B)全部添加至溶液(A)的试管中。

7.     轻敲试管,使溶液混合均匀。再用台式离心机降速处理。

8.     在室温下孵浴5~20分钟。

配制配制细胞悬浮液


1.     从恒温箱里取出【细胞的前期培养】的烧瓶。

2.     去除培养基,用PBS清洗一次。

3.     向烧瓶里添加2 mL胰蛋白酶溶液后,放入室温、5%CO2的恒温箱里培养,

        直到细胞从培养容器中脱落。

4.     加入约5 mL FBS添加培养基使反应停止。

5.     利用移液器使细胞分散,将全部培养液转移到离心管中。

6.     150×g离心,5分钟。

7.     去除上清时不要去掉颗粒物。

8.     添加5~10 mL新的培养基,利用移液器使细胞分散。

9.     用血细胞计数板等的细胞计算器检测细胞数。

10.  检测出细胞悬浮液的浓度后经过计算,以此配制2.0×105 cells/mL的细胞悬浮液。

     (配制的细胞悬浮液量可根据实验规模进行适当地调节。)

转染


1.     将500 μL在【配制细胞悬浮液】时配制好的细胞悬浮液添加至细胞培养板里。

2.     将50 μL在【配制转染试剂】步骤8中孵浴的DNA-lipid complex添加至细胞培养板里,

        轻摇培养板使溶液混合(也可以先往细胞培养板里加入50 μL DNA-lipid complex,

        再加入500 μL细胞悬浮液)。

3.     放入CO2的恒温箱里培养24~48小时后即可进行后续实验。

 

 

实验数据


  用逆向转染法和正向转染法向HeLa细胞进行PIK3CB siRNA的导入实验,通过实时定量PCR检测出PIK3CB mRNA的表达量。将定量结果得出的敲减效率,与原来用其他公司的产品进行实验得出的敲减效率进行比较,结果显示,ScreenFect ™ siRNA拥有高于其他公司产品抑制目的基因表达的效率。


【逆向转染(1-STEP)】

ScreenFect™ 通信 向HeLa细胞导入siRNA数据



【正向转染(2-STEP)】

ScreenFect™ 通信 向HeLa细胞导入siRNA数据


◆产品列表


产品编号

产品名称

规格

包装

299-75001

ScreenFect ™ siRNA转染试剂

ScreenFect ™ siRNA

 基因研究用

0.2 mL

295-75003

1 mL

293-75004

1 mL×5

 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格