SDS-PAGE凝胶配制试剂盒

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SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 
 
产品编号： P0818  CAS号：  
分子式：   分子量：  
EINECS编号：  

产品简介：

聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)，其原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及 SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。

Jinpan SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒不仅可用于配制 SDS- PAGE 凝胶，也可配制非变性(native)PAGE 凝胶，30T 一般可以配制 30～40 块，具体配制的量应根据器具大小决定。

产品组成：

编号

名称

P0818

30T

Storage

试剂(A): 30% Acr -Bis(29:1)

100ml

4℃  避光

试剂(B): 1.5M Tris-HCl(pH8.8)  

100ml

RT

试剂(C): 10% SDS  

5ml

RT

试剂(D): Ammonium Persulfate  

0.5g

RT

试剂(E): TEMED

1.5ml

4℃  避光

试剂(F): 1M Tris-HCl(pH6.8)  

15ml

RT

使用说明书

1份

 

 

操作步骤(仅供参考)：

1、  配制 10%过硫酸铵：直接在 0.5g  Ammonium Persulfate 中加入 5ml 蒸馏水，充分溶解，分装成小份储存于-20℃或 4℃。

2、根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照下面的表格配制 SDS-PAGE 的分离胶(下层胶)：

不同浓度的 SDS-PAGE 分离胶的最佳分离范围：

 

 

SDS-PAGE 分离胶浓度

最佳分离范围

6%胶

50-150kD

8%胶

30-90kD

10%胶

20-80kD

12%胶

12-60kD

15%胶

10-40kD

 

 

 

 

成分

配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml)

6%胶

5

10

15

20

25

30

40

50

蒸馏水

2.6

5.3

7.9

10.6

13.2

15.9

21.2

26.5

30%Acr-Bis(29:1)

1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

6.0

8.0 

10.0

1.5M Tris,pH8.8  

1.3

2.5

3.8

5.0

6.3

7.5

10

12.5

10%SDS

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

10%过硫酸铵

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

TEMED  

0.004

0.008

0.012

0.016

0.02

0.024

0.032

0.04

 

 

 

 

成分

配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml)

8%胶

5

10

15

20

25

30

40

50

蒸馏水

2.3

4.6

6.9

9.3

11.5

13.9

18.5

23.2

30%Acr-Bis(29:1)

1.3

2.7

4.0

5.3

6.7

8.0

10.7

13.3

1.5M Tris,pH8.8  

1.3

2.5

3.8

5.0

6.3

7.5

10

12.5

10%SDS

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

10%过硫酸铵

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

TEMED  

0.003

0.006

0.009

0.012

0.015

0.018

0.024

0.03

 

 

 

 

成分

配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml)

10%胶

5

10

15

20

25

30

40

50

蒸馏水

1.9

4.0

5.9  

7.9

9.9

11.9  

15.9

19.8

30%Acr-Bis(29:1)

1.7

3.3

5.0

6.7

8.3

10

13.3

16.7

1.5M Tris,pH8.8  

1.3

2.5

3.8

5.0

6.3

7.5

10

12.5

10%SDS

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

10%过硫酸铵

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

TEMED  

0.002

0.004

0.006

0.008

0.01

0.012

0.016

0.02

 

 

成分

配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml)

12%胶

5

10

15

20

25

30

40

50

蒸馏水

1.7

3.3

4.9  

6.6

8.2

9.9

13.2

16.5

30%Acr-Bis(29:1)

2.0

4.0

6.0

8.0

10.0

12.0

16.0

20.0

1.5M Tris,pH8.8  

1.3

2.5

3.8

5.0

6.3

7.5

10

12.5

10%SDS

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

10%过硫酸铵

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

TEMED  

0.002

0.004

0.006

0.008

0.01

0.012

0.016

0.02

 

 

 

 

成分

配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml)

15%胶

5

10

15

20

25

30

40

50

蒸馏水

1.1

2.3

3.4

4.6

5.7

6.9

9.2

11.5

30%Acr-Bis(29:1)

2.5

5

7.5

10

12.5

15.0

20.0

25.0

1.5M Tris,pH8.8  

1.3

2.5

3.8

5.0

6.3

7.5

10

12.5

10%SDS

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

10%过硫酸铵

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

TEMED  

0.002

0.004

0.006

0.008

0.01

0.012

0.016

0.02

注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加 10%SDS 即可配制成非变性 PAGE 胶。

3、  按照如下表格配制 SDS-PAGE 的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)

 

 

成分

配制不同体积 SDS-PAGE 浓缩胶所需各成分的体积(ml)

5%胶

1

2

3

4

6

8

10

蒸馏水

0.68

1.4  

2.1  

2.7

4.1  

5.5

6.8

30%Acr -Bis(29:1)  

0.17

0.33  

0.5  

0.67

1.0  

1.3

1.7

1M Tris,pH6.8  

0.13

0.25  

0.38  

0.5

0.75  

1.0

1.25

10%SDS  

0.01

0.02  

0.03  

0.04

0.06  

0.08  

0.1

10%过硫酸铵

0.01

0.02  

0.03  

0.04

0.06  

0.08  

0.1

TEMED

0.001  

0.002  

0.003  

0.004  

0.006  

0.008  

0.01

 

 

 

 

注意事项：

 

 

1、  过硫酸铵配制成 10%溶液后应当-20℃保存。应尽量减少室温存放时间以防失效。有效避免失效的方法是分成小份， -20℃保存，用 2~3 次，剩余的弃用，亦可 4℃保存几天。

2、  TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节 TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

3、  配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于 37℃放置，加速凝固。

4、  30%Acr-Bis(29:1)有轻微神经毒性，请小心操作。

5、  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。