银染试剂盒

 

将快速、简便及亚纳克级灵敏度有效地结合在一起。

• 极低的，均一的背景。
• 可以检测出0.25纳克以下的蛋白。
• 可在50分钟以内完成染色。
• 可以与各种自制的、预制的凝胶兼容。
• 一相或者两相PAGE及IEF凝胶的理想选择。
• 也可用于DNA或RNA的染色。
• 可灵活地选择染色方法，而不会改变灵敏度或背景。
• 可选择固定30分钟或固定过夜。
• 可选择在5分钟完成染色或者染至20个小时。
• 与质谱中的洗脱方法兼容。

Thermo Scientific 银染试剂使用方法

 

 

• 蛋白电泳及总蛋白染色
• 通过电泳（1D或者2D）将蛋白条带分离之后，可以使用不同的胶内检测方法来观测蛋白条带。最常规的胶内蛋白检测方法是考马斯染料染色。考马斯染色试剂的配方在很多文献中有介绍，一般是使用染料G-250（“胶状”； 产品货号20278） 或R-250 （产品货号20279）来配制染料。我们提供三种特殊的基于考马斯方法的凝胶染色试剂。Thermo Scientific GelCode蓝色染色试剂（产品货号24590、24592）是一种胶状的考马斯试剂，该试剂能够在一小时以内完成对蛋白的高效染色，并且仅需水即可脱色（无需甲醇或乙酸）。Thermo Scientific GelCode BlueSafe染色试剂（产品货号24594、24596）是一种胶状的考马斯试剂，它不属于危险品，无需为运输多付费用。ThermoScientific Imperial蛋白染色试剂（产品货号 24615、24617）使用考马斯R-250染料的一种新的配方，能够产生明显的紫色条带，并且其灵敏度超过传统的考马斯染色的两倍。这三种染色试剂均与后续的胰蛋白酶消化和质谱兼容，并且可以检测到10纳克以下的蛋白条带。
          胶内检测蛋白的另一种常用的方法是银染，该方法的原理是将金属银颗粒沉积在凝胶蛋白条带的位置上。使用Thermo Scientific 有色银染试剂（产品货号24597），银离子会结合在蛋白上，然后这些结合的银离子会被甲醛和碱（氢氧化钠）所还原从而使蛋白条带被染成黑色、蓝灰色、红色或黄色，这些颜色是由蛋白的电荷或其他特性来决定的。使用这种染料可以将2D凝胶中重叠的蛋白染成不同的色以便分析。Thermo Scientific 银染试剂（产品货号24612）使用类似于甲醛增强的方法来获得对蛋白条带的灰褐色的单色染色。银染试剂结果非常稳定并且易于使用，可以检测到传统胶上低于0.5纳克的蛋白。许多其他的银染方法中的增强剂戊二醛或甲醛会将蛋白不可逆地交联在凝胶介质上。我们的银染试剂与之不同，该试剂与质谱中的脱色及洗脱方法完全兼容。可用于质谱的Thermo Scientific银染试剂（产品货号24600）包括银染试剂及后续处理染色的条带所需的其它成分。Thermo Scientific可逆锌染色试剂（产品货号24582）不是直接对蛋白条带进行染色，而是会在15分钟以内在不透明的背景下（白色）产生透明的（未染色的）蛋白条带。在胶下放置一个黑色的背景即可对胶进行拍照。锌染色方法与常规的银染方法的灵敏度相同（可检测<1纳克的蛋白），但是该方法不需要固定并且是可逆的（脱色），因此与下游的质谱（MS）或蛋白免疫印迹完全兼容。在最近几年，荧光成像系统的发展使研究者对荧光染料的需求大大地提高了。Thermo Scientific Krypton蛋白染色试剂（产品货号46629、46630）可以简单、快速（30-160分钟）地得到极好的荧光染色结果。激发和发射峰（520/580纳米）与大多数荧光成像系统的普通滤镜组和激光设定吻合。该染色试剂的价格合理并且与质谱等其他的下游应用完全兼容。ThermoScientific Krypton红外蛋白染色试剂（产品货号53071、53070）的许多特点与Krypton蛋白染色试剂相同，但是该染色试剂产生的是光谱红外区的信号（激发/发射：690/720纳米）。
   
  对特殊功能基团进行染色
          试验中我们经常需要在胶内对某一类蛋白进行检测，而不是检测所有的蛋白。Thermo Scientific 糖蛋白染色试剂（产品货号24562）可以检测到经过糖基化的翻译后修饰的蛋白。经过50%甲醇和乙酸的固定和洗涤之后，利用高碘酸钠氧化糖蛋白上的糖基团以便形成能够和含有氨基染料发生反应的醛基。后续的还原反应会稳定蛋白-染料之间的连接键并产生明亮的红紫色条带。Thermo Scientific Krypton糖蛋白染色试剂盒（产品货号53074）所使用的方法与之类似，但是检测所使用的染料为荧光染料（激发/发射：646/674纳米）。
          Thermo Scientific磷酸化蛋白染色试剂盒（产品货号24550）是用于检测高丰度的磷酸化蛋白的。它从磷酸化的丝氨酸和磷酸化的苏氨酸上将磷酸基团切下来，自由的磷酸基团会与钙形成沉淀。然后使用钼酸盐和甲基绿检测沉淀。同一块胶可以使用GelCode蓝色染色试剂对总蛋白进行染色以便进行比较。每次实验的检测灵敏度会有变化，因此需要根据每次的实验结果进行判定。
          含有六聚组氨酸标签的融合蛋白可以使用ThermoScientific 6xHis蛋白标签染色试剂盒（产品货号24575）进行染色。整个染色的过程仅需不到两小时，并且在蛋白量很高的时候不需要进行转膜和基于抗体的检测过程。当利用紫外光（300纳米）对胶进行激发或者利用CCD相机进行拍照的时候含六聚组氨酸标签的蛋白会产生黄色的荧光条带。该方法可以检测到少于0.25微克的组氨酸标签蛋白，因此可以用于判定细菌裂解液中的标签蛋白的表达水平。在进行了这种染色之后仍然可以利用GelCode蓝色染料或Imperial蛋白染色试剂进行总蛋白染色。