过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒BC0090

过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒BC0090

产品名称:过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒

产品型号:BC0090

产品特点:过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒
POD广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

BC0090过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒的详细资料:

 

过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书(分光光度法)

货号:BC0090

规格:50管/48样

产品简介:

POD广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒产品内容:

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体×2瓶,4℃保存;用时每瓶加入5mL试剂一,现配现用;

试剂三:液体10mL×1瓶,4保存

操作步骤:

一、粗酶液提取:   

1、细菌、细胞或组织样品的制备   

收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1ml提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率200w,超声3秒,间隔10秒。重复30次);8000g 4离心10分钟,取上清,置冰上待测。

称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4离心10分钟,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

二、POD测定操作 

试剂名称(μL)

测定管

试剂

520

试剂

130

试剂

135

蒸馏水

270

样本

15

测定前将试剂一、二和三 37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)放置10min。在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂,加入样本后立即混匀并计时,记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1

注意:如果ΔA小于0.005,可将反应时间延长到5min。如果ΔA大于0.5,可将样本提取液稀释后测定,计算公式中乘以相应的稀释倍数

POD活性计算:   

1、血清(浆)POD活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)在反应体系中每分钟使A470变化0.01定义为一个酶活力单位。

POD(U/L)=反应总体积(1070ul)÷样本体积(15ul)÷0.01×ΔA=7133×ΔA

2、组织POD活力计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟使A470变化0.01定义为一个酶活力单位。

POD(U/mg prot)=反应总体积(1070ul)÷样本体积(15ul)÷0.01×ΔA÷样本蛋白浓度(mg/ml)=7133×ΔA÷样本蛋白浓度(mg/ml)

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟使A470变化0.01定义为一个酶活力单位。

POD(U/g mass)=反应总体积(1070ul)÷样本体积(15ul)÷0.01×ΔA÷样本质量=7133×ΔA÷样本质量

3、按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟使A470变化0.01定义为一个酶活力单位。

POD(U/104 cell)=反应总体积(1070ul)÷样本体积(15ul)÷0.01×ΔA÷500(104 cell /mL)=14.27×ΔA

过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒BC0090