丙酮酸（PA）含量检测试剂盒BC2200
产品名称：丙酮酸（PA）含量检测试剂盒
产品型号：BC2200
产品特点：丙酮酸（PA）含量检测试剂盒丙酮酸通过乙酰CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。
BC2200丙酮酸（PA）含量检测试剂盒的详细资料：
丙酮酸(PA)含量检测试剂盒
丙酮酸(PA)含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC2200
规格：50T/48S
产品内容：
提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体9mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：液体50mL×1 瓶， 4℃保存；
丙酮酸钠标准液，1mg/mL：液体1mL×1瓶， 4℃保存。
产品说明：
丙酮酸通过乙酰CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。
丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、丙酮酸提取：
1、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次），静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
2、 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
3、 血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
4、 标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0g/ml。
二、测定步骤：
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长520nm，蒸馏水调零。
2、 取300μL标准品或样本+100μL 试剂一于1.5mL EP 管中，混匀，静置2min，加入500μL 试剂二，混匀，于520nm 波长处测定吸光值A。
三、丙酮酸含量计算：
1、 根据标准品浓度和测定值建立标准曲线；y为丙酮酸钠含量（μg/mL），x为吸光值。
2、 按照血清（浆）体积计算
丙酮酸含量（μg/mL）= (y×V1)÷（V3×V1÷V2）=y×10
3、 按照蛋白浓度计算
丙酮酸含量（μg/mg prot）=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr
4、 按照样品质量计算
丙酮酸含量（μg/g 鲜重）= (y×V1)÷(W ×V1÷V2）=y÷W
5、 按照细菌或细胞密度计算
丙酮酸含量（μg/104 cell）＝(y×V1)÷（500×V1÷V2）= y÷500
V1：加入反应体系中样本体积，0.3mL；
V2：加入提取液体积，1 mL；
V3：加入血清（浆）体积，0.1 mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；
500：细菌或细胞总数，500 万。
相关文献：
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