PCR试剂 2×Pfu PCR MasterMix (含染料)PC1320

PCR试剂 2×Pfu PCR MasterMix (含染料)PC1320

产品名称:PCR试剂 2×Pfu PCR MasterMix (含染料)

产品型号:PC1320

产品特点:PCR试剂 2×Pfu PCR MasterMix (含染料)
货号:PC1320
规格 :500U/1000U
浓度 :5U/ul
保存 :-20℃保存, 有效期少一年。

PC1320PCR试剂 2×Pfu PCR MasterMix (含染料)的详细资料:

PCR试剂 2×Pfu PCR MasterMix (含染料)
货号:PC1320 
规格 :500U/1000U
浓度 :5U/ul
保存 :-20℃保存, 有效期少一年。

产品简介 :
     Pfu DNA Ploymerase 是从克隆有 Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白,其分子量为 90kD。由于 Pfu 酶具有 3’→5’核酸外切酶活性,它能纠正 DNA 扩增过程中产生的错配,而传统的 Taq 酶却不能,其它耐热 DNA Polymerase 如 Vent、Deep Vent、Tli、UITma 等虽具有校正功能, 但 Pfu 酶是目前已发现的所有耐热 DNA Polymerase 中出错率低的。 Pfu 酶无 5’→3’核酸外切酶活性,PCR 反应中的延伸速度一般为 0.5-1kb/min,比 Taq 酶要低。Pfu 酶比 Taq 酶热稳定性更好,95 1 ℃ 小时仍保持90%以上的活性,对于 GC 含量很高的模板,变性温度可以提高到 98℃而不影响其活性。Pfu 酶的 PCR 产物为平末端,可加 A 处理再与 T-载体连接或使用平末端克隆载体。

活性定义 :
    1 单位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定义为在 74℃,30 分钟内,以活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物,将 10 nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制 :
    SDS-PAGE 检测 Pfu DNA Polymerase 纯度大于 99%; 经检测无外源核酸酶活性; PCR 方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增人类基因组中的单拷贝基因;室温存放一周,无明显活性改变。

酶贮存缓冲液 :
    50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol;其他成份。

适用范围 :
    用于 DNA 的高保真扩增,如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析(SNP)和末端补平等。
    建议 PCR 体系(以 50µl 反应体系为例)

Template <0.5µg
上游引物(10µM)  1µl
下游引物(10µM)  1µl
10×Buffer(含 Mg 2+ ) 5µl
dNTP(各 2.5mM)  4µl
Pfu DNA Polymerase  0.5-1µl
ddH2O up to 50µl

注意事项 :

1、PCR 反应体系加样时,后一步加入 Pfu DNA Ploymerase,整个过程宜在冰上操作。
2、取 Pfu DNA Ploymerase 做 PCR 反应时,请用高压灭菌处理过的吸头。
3、10×Pfu Buffer 中含 20 mM Mg 2+ ,如 PCR 反应需要较高 Mg 2+ 浓度,请另行加入。
4、 用Pfu酶扩增时, 引物的纯度要求较高, 引物长度大于18个碱基, Tm值在55-80℃之间, 引物浓度在0.1-0.5uM之间,比 Taq 酶略高。

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2、低温产品:低温产品运输过程中加装金畔生物冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入金畔生物的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
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