小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒P8860
产品名称：小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒
产品型号：P8860
产品特点：小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒货号：P8860规格：200ml/KIT保存 ：室温避光储存，有效期少 2 年。
P8860小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒的详细资料：
小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒
货号 ：P8860
规格 ：200ml
保存 ：室温避光储存，有效期少 2 年。
试剂盒内容 ：
全血及组织稀释液 200ml
细胞洗涤液 200ml
试剂C 200ml
试剂F 200ml
说明书 1 份
脾脏组织单细胞悬液的制备方法
注 ：A ．全过程及所需试剂要求无菌环境 。
B ．本试剂盒中不包含胶原酶，若采用酶消化法制备单细胞悬液 ， 请客户根据各实验室要求另购不同类型胶原酶 。
1. 剪碎法：将组织块放入平皿后，加入少量F液及20%胎牛血清；用眼科剪将组织剪匀浆状，加入5mlF液及20%胎牛血清；用吸管吸取组织匀浆，用100目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内；离心沉淀1500转/分×3min，再用细胞洗涤液清洗3次，每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片，以200目不锈钢滤网（另购）过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×10 7 个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。
2. 匀浆器法：用眼科剪将组织剪成小块；放入70ml组织研磨器内，加入2mlF液及20%胎牛血清；缓慢转动研棒，研磨匀浆；用5mlF液及20%胎牛血清冲洗研器；收集细胞悬液，经200目不锈钢滤网（另购）过滤；
离心沉淀800rpm×2min ，再用细胞洗涤液洗3次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×10 7个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。
3. 酶消化法：
A．用F液将胶原酶稀释，终浓度为400 U/ml，于冰浴备用。
B．取一适当大小培养皿进行操作：用镊子夹碎动物脾脏，加入稀释后的胶原酶，37℃消化20分钟。
C．以100或200目不锈钢滤网（另购）过滤，离心沉淀800prm×2min ，再用细胞洗涤液洗3次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5×10 7 个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。
细胞计数方法:
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。既可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。
不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。
计数与计算过程
1）在细胞计数板中央放置计数的盖玻片。
2）用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，盖玻片被液体充满为止。
3）置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。
4）按下式计数细胞悬液的密度： 细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×10 4 个/ml×稀释倍数公式中乘以10 4 因为计数板中每一个大格的体积为：
1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm 3 而 1ml＝1000mm 3
细胞计数要点：
A．进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于10 4 个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中；显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm 2 或>500个/10 mm 2 时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。
B．要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。
C． 取样计数前， 应充分混匀细胞悬液， 尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀， 以求计数准确；
D．数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计左线，不计右线。
E． 操作时，注意盖玻片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。
? 脾脏淋巴细胞分离方法
1．取1ml脾脏细胞悬液（细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml）小心叠加在C 液之液面上（比例为1：1），20℃±2℃，400g（约1500 转/分），离心20 分钟（半径15cm 水平转子）。
2. 此时离心管中由上下细胞分四层。*层;为稀释液层。第二层；为环状乳白色淋巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含细胞洗涤液4-5 毫升的试管中，充分混匀后，以500g（约1800 转/分）离心20 分钟。沉淀经反复洗涤2 次即得所需淋巴细胞。
注： 提取率约为80%。
分离图例：
三 、 注意事项
A． 本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存，启封后置4℃保存避免微生物污染。另外，本品为真空包装，未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶，影响分离效果。
B． 待分离的骨髓要求新鲜，避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果好，且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。
C． 由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，摸索佳的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。
D． 好使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
四 、 产品性能指标
pH 7.0-7.5
渗透压 280-340mOsmol/kg
内毒素 ≤0.5EU/ml
无菌 直接接种培养14 天后培养基澄清
澄明度及不溶性颗粒物 每50ml 溶液中含10µm 以上的不溶性微粒20 粒以下，
含25µm 以上的不溶性微粒5 粒以下
五 、 贮藏及保存期限
18℃-25℃避光保存，有效期两年。启封后置4℃保存，有效期一周。
注：若保证无微生物污染，启封后可置4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒
参考文献：
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《Improved Antitumor Efficacy of Combined Vaccine Based on the Induced HUVECs and DC-CT26 Against Colorectal Carcinoma》 作者:Qiushuang Zhang 1,?, Chao Xie 1,?, Dongyu Wang 1, Yi Yang 1, Hangfan Liu 1, Kangdong Liu 1,2, Jimin Zhao 1,2, Xinhuan Chen 1,2, Xiaoyan Zhang 1,2, Wanjing Yang 1,2, Xiang Li 1,2, Fang Tian 1,2, Ziming Dong 1,2 and Jing Lu 期刊:Cells 影响因子:5.656 PMID:31121964
《Protective Role of Peroxiredoxin I in Heat-Killed Staphylococcus Aureus-infected Mice》 作者:HU-NAN SUN,YUE LIU1,JIAN-NAN WANG, CHUANG WANG, REN LIU, LING-ZU KONG, XING ZHEN, NISANSALA CHANDIMALI, YU-DONG CUI, SUN-UK KIM, DONG-SEOK LEE, DAE-YEUL YU, JI-SU KIM, DONG KEE JEONG, TAEHO KWON6 and YING-HAO HAN1 期刊:In Vivo 影响因子:1.609 PMID:31028193
《Artificially designed hepatitis B virus core particles composed of multiple epitopes of type A and O foot‐and‐mouth disease virus as a bivalent vaccine candidate》 作者:Yao Lei, Junjun Shao, Furong Zhao, Yangfan Li , Chenglin Lei , Feifei Ma , Huiyun Chang , Yongguang Zhang 期刊:J. Med. Virol. 影响因子:2.049 PMID:31347713