β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法BC2625 2880

产品名称：β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法

产品型号：BC2625 2880

产品特点：β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法
品牌：Jinpan | 货号：BC2625
检测方法 : 微量法
规格：100管/48样

BC2625 2880β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法的详细资料：

            β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法

测定意义：β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。

测定原理：β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰，测定405nm光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。

需要的仪器，耗材:天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。 

                β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法

一、粗酶液提取： 1. 植物样本：称取约 0.1g 样品，加 1mL 提取液充分冰浴匀浆，然后 12000rpm，4℃，离心 20min，弃沉淀 ，取 20μL 上清测定蛋白含量，剩余上清作为待测酶液。 2. 细菌、真菌样本：收集约 500 万个细胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎（冰浴，功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000rpm，4℃，离心 10min，弃沉淀 ，取 20μL 上清测定蛋白含量，剩余上清置于冰上待测。 3. 标准液的处理：用试剂二将标准液稀释 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0μmol/ml。二、测定操作表： 1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长 405nm，对照管调零。 2、操作表对照管 测定管 标准管酶液（μL） 40 40 40 试剂一（μL） 10 试剂二（μL） 80 70 80 混匀，45℃水浴 20min 试剂三（μL） 80 80 80 混匀，静置 5min，对照管调零， 微量石英比色皿/96 孔板，测定 405nm 吸光值，记为 A405。

                   β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法

β-木糖苷酶活性计算公式：根据标准管的吸光度（x）和浓度（y，μmol/ml）建立标准曲线，将△A带入标准曲线中，计算 样品生成的产物量（μmol/ml）。 1、按蛋白含量计算酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1 mol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性（μmol/min / mg prot）=(y×V 反总)÷(V 样×Cpr)÷T=0.25×y÷Cpr 2、按样本质量计算：酶活定义：45℃，pH7.4 时，每克样品 1min 内催化产生 1 mol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性（μmol/min /g）＝(y×V 反总)÷(W×V 样÷V 样总)÷T=0.25×y ÷W 3. 按细胞数量计算：酶活定义：45℃，pH7.4 时，每 10 4个细胞 1min 内催化产生 1 mol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性（μmol/min /10 4cell）= (y×V 反总)÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.0005×y Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.2mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g； 500：细胞或细菌总数， 500 万；T：反应时间，20min。