线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒BC3230

线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒BC3230

产品名称:线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒

产品型号:BC3230

产品特点:线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒
复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q 可进一步还原2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在605nm 有特征吸收峰,通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。

BC3230线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒的详细资料:

线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒

 

产品名称:  线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒

产品英文名:Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅡActivity Assay Kit

产品货号:BC3230           产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:50管/48样         产品商标:Jinpan
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            参考价格:2200
库存状态:现货                          
关键字:       线粒体呼吸链复合体Ⅱ检测试剂盒|  线粒体呼吸链复合体Ⅱ|线粒体呼吸链|试剂盒

简要介绍:
线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q 还原酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同时辅基FAD 还原为FADH2,后者进一步还原氧化型辅酶Q 生成还原型辅酶Q,是呼吸电子传递链的支路。
    复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q 可进一步还原2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在605nm 有特征吸收峰,通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。

产品详细描述
产品内容:
提取液:液体45mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体40mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,-20℃保存;溶于1mL丙tong,可分装后-20℃保存。临用前再用丙tong100倍稀释后使用。
试剂三:粉剂×1 支,4℃保存;临用前加入2mL丙tong溶解备用。
试剂四:液体2.5mL×1 瓶,4℃保存;
产品说明
线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q 还原酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同时辅基FAD 还原为FADH2,后者进一步还原氧化型辅酶Q 生成还原型辅酶Q,是呼吸电子传递链的支路。
复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q 可进一步还原2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在605nm 有特征吸收峰,通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、丙tong、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、复合体Ⅱ的提取: 

  1. 称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1.0 mL提取液,用匀浆器或研钵于冰上匀浆。
  2. 4 ℃ 600 g离心10min。
  3. 将上清液移另一离心管中,4 ℃ 11000 g离心15min。
  4. 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅱ(此步可选做,可以判断线粒体提取效果)。
  5. 在沉淀中加入400μL提取液,超声波破碎(功率20%,超声5秒,间隔10秒,重复15次),用于复合体Ⅱ酶活性测定,并且用于蛋白含量测定。

二、测定步骤:

  1. 可见分光光度计预热30min 以上,调节波长605nm,蒸馏水调零。
  2. 样本测定
  1. 工作液的配制:临用前将试剂二和试剂三按1:1混合,现用现配;
  2. 将试剂一37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)预热15min;
  3. 在1mL玻璃比色皿中分别加入:
试剂名称 测定管
样本 50
试剂一 750
工作液 100
试剂四 100
将上述试剂分别加入比色皿后迅速吹打混匀,记录第10s的吸光值A1,迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴中准确反应2分钟,之后迅速取出比色皿并擦干,记录2min时的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2。

三、复合体Ⅱ活力单位的计算:  
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg 组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(U/mg prot)= [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T= 476.2×ΔA÷Cpr
V 反总:反应体系总体积,10-3 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。
注意事项:

  1. 为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果测定的吸光值过高(高于1.5),可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA大于0.4,需将样本稀释适当倍数(计算公式中乘以相应稀释倍数);若ΔA偏小,则可以通过增加加入的样品体积来提高灵敏度。
  2. 样品蛋白浓度需自行测定,推荐我公司BCA蛋白浓度测定试剂盒。由于提取液中含有蛋白,所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
  3. 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活,若用样本鲜重计算,则需加测胞浆提取物酶活,上清和沉淀酶活之和方为总酶活。
  4. 本试剂盒试剂足够完成25管反应。
  5. 附:使用样本重量计算公式:(样本检测数为25T/12S)

A、上清中复合体II活力的计算:
按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位
复合体II活性(U/g= [ΔA1×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V样本)÷T
                    =476.2×ΔA1÷W
ΔA1:上清测定值;V 反总:反应体系总体积,10-3 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V提取:加入提取液体积,1mL ;V 样:加入样本体积,0.05mL;T:反应时间,2 min;W:样本重量,g
B、沉淀中复合体II活力的计算:
按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位
复合体II活性(U/g= [ΔA2×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V样本)÷T
                    =190.5×ΔA2÷W
ΔA2:沉淀测定值;V 反总:反应体系总体积,10-3 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V提取:沉淀重悬体积,0.4mL ;V 样:加入样本体积,0.05mL;T:反应时间,2 min;W:样本重量,g
C、样本复合体II总活力的计算:
样本复合体II总活力即为上清中复合体II活力与沉淀中复合体II活力之和。
按样本鲜重计算:
复合体IIU/g 鲜重)=476.2×ΔA1÷W +190.5×ΔA2÷W

相关文献:
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