X-gal(20mg/ml)基因工程X1010-1

X-gal(20mg/ml)基因工程X1010-1

产品名称:X-gal(20mg/ml)基因工程

产品型号:X1010-1

产品特点:X-gal(20mg/ml)基因工程
20mg/ml,DMF溶解
保存条件:-20℃避光保存。

X1010-1X-gal(20mg/ml)基因工程的详细资料:

X-gal(20mg/ml)基因工程

X-gal溶液(20mg/ml)    此产品为X-gal用DMF溶解过滤后配成的溶液。

X-gal(20mg/ml)基因工程使用方法:

在100 ml的琼脂培养基中,加入200 μl的上述溶液、40 μl的IPTG(200mg/ml)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成X-Gal、IPTG、Amp平板培养基(实际上X-gal和IPTG可以直接涂抹在平板培养基表面,干半小时后就可以用,90mM的平板,X-gal(20mg/ml)涂40ul,IPTG涂7ul。150mm的板加倍)。可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。

细菌蓝白斑筛选原理:IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。

使用浓度:IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml

直接涂板法:取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50~100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放表面无水后即可使用。

预制板:倒板时,在温度降50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混匀后制板即可。

注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

2、X-gal对光敏感,含有X-gal的平板应该避光保存,在1~2周内使用;

3、过夜培养后蓝白斑显示不明显可将平板放入4℃冰箱中,一段时间后蓝白斑显示会比较明显,便于挑选