琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒BC0955

琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒BC0955

产品名称:琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒

产品型号:BC0955

产品特点:琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒
测定意义:SDH(EC 1.3.5.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
测定原理:SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递还原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且

BC0955琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒的详细资料:

琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒

操作步骤:

一、样本的前处理:组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

1、 称取约0.1g 组织或收集500 万细菌或细胞,加入1mL 试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2、 将匀浆600g,4℃离心5min。

3、 弃沉淀,将上清液移另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

4、 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的SDH(此步可选做)。

5、 在步骤④的沉淀中加入200uL 试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3 秒,间隔10 秒,重复30 次),用于线粒体SDH 活性测定。

二、测定步骤和加样表

1、 分光光度计或酶标仪预热30min 以上,调节波长600nm,蒸馏水调零。

2、 样本测定(1)在试剂四中加入18mL 蒸馏水充分溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min; 用不完的试剂4℃保存一周;(2)在试剂五中加入1mL 蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存一周;(3)在微量石英比色皿或96 孔板中加入10μL 样本、10μL 试剂五和180μL 试剂四,混匀,立即记录600nm 处20s 时的吸光值A1 和 1min20s 后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。

琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1) 按样本蛋白浓度计算单位的定义:每mg 组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 样) ÷T=952×ΔA÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算单位的定义:每g 组织每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=192×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算单位的定义:每1 万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性(nmol/min/10 4 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.385×ΔA V 反总:反应体系总体积,2×10 -4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×10 4 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

b. 用96 孔板测定的计算公式如下

(1) 按样本蛋白浓度计算单位的定义:每mg 组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(V 样×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算单位的定义:每g 组织每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=384×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算单位的定义:每1 万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性(nmol/min/10 4 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.77×ΔA V 反总:反应体系总体积,2×10 -4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×10 4 L / mol /cm;d: 96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,0.202mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

 

试剂一:100mL×1 瓶,-20℃保存;试剂二:20mL×1 瓶,-20℃保存;试剂三:1.5mL×1 支,-20℃保存;试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;试剂五:粉剂×1 支,-20℃保存;

相关文献: 

《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448