小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒P8860
产品名称：Jinpan 小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒
产品型号：P8860
产品特点：Jinpan 小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒注意事项A． 本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存，启封后置4℃保存避免微生物污染。另外，本品为真空包装，未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶，影响分离效果。B． 待分离的样本要求新鲜，避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时
P8860Jinpan 小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒的详细资料：
Jinpan 小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒
Jinpan 小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒
注意事项
A． 本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存，启封后置4℃保存避免微生物污染。另外，本品为真空包装，未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶，影响分离效果。
B． 待分离的样本要求新鲜，避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在20℃水浴
箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果好，且所有操作
过程一定要在无菌条件下进行。
C． 由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响
分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，摸索佳的分离条件（具体分离条件
各实验室自定）。D． 好使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
E． 分离过程中所用其他试剂如：hydroxyethyl starch550、全血及组织稀释液、细胞洗涤液及
红细胞裂解液等以我公司产品为优选择，本公司相关系列产品无菌、无病毒、无支原体、
低内毒素水平且无细胞毒性，所获得的细胞可保持完好的生物活性和完整的细胞形态。
4. 应 用
适用于从各种动物脾脏中分离淋巴细胞。
5. 产品性能指标pH 7.0-7.5
渗透压 280-340mOsmol/kg
内毒素 ≤0.5EU/ml
无菌 直接接种培养14 天后培养基澄清
澄明度及不溶性颗粒物 每50ml溶液中含10μm以上的不溶性微粒20粒以下，
含25μm以上的不溶性微粒5粒以下
6. 贮藏及保存期限
18℃-25℃避光保存，有效期两年。启封后置4℃保存，有效期一周。
注：若保证无微生物污染，启封后可置4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易
出现白色结晶，影响分离效果。7. 实验前准备
A． 试剂
脾脏淋巴细胞分离液试剂盒所含试剂、胎牛血清
B． 器材
玻璃离心管、玻璃滴管
水平转子离心机、无菌工作台
8. 各种动物脾脏淋巴细胞分离液使用方法说明及图例
取 1ml 脾脏细胞悬液（细胞浓度为2×108-1×109个/ml，制备方法详见“9、脾脏组织
单细胞悬液的制备方法”）小心叠加在C 液之液面上（比例为1：1），20℃±2℃，400g（约
1500 转/分），离心20 分钟（半径15cm 水平转子）。此时离心管中由上下细胞分四层。*层;为稀释液层。第二层；为环状乳白色淋巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含细胞洗涤液4-5 毫升的试管中，充分混匀后，以500g（约1800 转/分）离心20 分钟。沉淀经反复洗涤2 次即得所需淋巴细胞
注： 提取率大于80%。
9. 脾脏组织单细胞悬液的制备
注： A. 全过程及所需试剂要求无菌环境。
B．本试剂盒中不包含胶原酶，若采用酶消化法制备单细胞悬液，请用户根据各实验
室要求另购不同类型胶原酶。
Ⅰ. 剪碎法：将组织块放入平皿后，加入少量 F液及 20%胎牛血清；用眼科剪将组织剪匀
浆状，加入5mlF 液及20%胎牛血清；用吸管吸取组织匀浆，用100 目不锈钢滤网（另购）过
滤到试管内；离心沉淀1500 转/分×3 min，再用细胞洗涤液清洗3 次，每次以500rpm 短时
低速离心除去细胞碎片，以200 目不锈钢滤网（另购）过滤去细胞团块。作细胞计数并调整
细胞浓度为（2～5）×107个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或
全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×108-1×109个/ml 的单细胞悬液备用。
Ⅱ. 匀浆器法：用眼科剪将组织剪成小块；放入 70ml 组织研磨器内，加入2mlF 液及20%胎
牛血清；缓慢转动研棒，研磨匀浆；用5mlF 液及20%胎牛血清冲洗研器；收集细胞悬液，
经200 目不锈钢滤网（另购）过滤；离心沉淀800rpm×2min ，再用细胞洗涤液洗3 次，离
心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×108-1×109个/ml 的单细胞悬液备用。
Ⅲ. 酶消化法：
A． 用F 液将胶原酶稀释，终浓度为400 U/ml，于冰浴备用。
B． 取一适当大小培养皿进行操作：用镊子夹碎动物脾脏，加入稀释后的胶原酶，37℃消化20 分钟。
C． 以100 或200 目不锈钢滤网（另购）过滤，离心沉淀800prm×2min ，再用细胞洗涤液
洗3 次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×108-1×109个/ml 的单细胞悬液备用。
计数与计算过程
1）、在细胞计数板中央放置计数的盖玻片。
2）、用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，
盖玻片被液体充满为止。
3）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，
对于细胞团按单个细胞计数。4）、按下式计数细胞悬液的密度：
细胞密度＝（4 个大格细胞总数/4）×104个/ml×稀释倍数公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm3而 1ml＝1000mm3
细胞计数要点：
A． 进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如果细胞数目很少要进行离
心再悬浮于少量培养液中；显微镜下计数时，遇到2 个以上细胞组成的细胞团，应按单个细
胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数<200 个/10mm
2或>500 个/10 mm2时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。
B． 要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。C． 取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确；
D． 数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细
胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计左线，不计右线。
E． 操作时，注意盖玻片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。
初学者易犯的错误：
A． 计数前未将待测悬液吹打均匀。
B． 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。
C． 滴入悬液时的量太多，使细胞悬液流入旁边的槽中。