脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)

脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)

产品名称:脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)

产品型号:

产品特点:脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)
Pro广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)的详细资料:

脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)说明书

货号:BC0255

规格: 100T/96S

脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)​产品简介:

HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤软骨和血管等,因此HYP含是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项要指标。

样品水解产生游离的HYP,进一补被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含

产品内容:

组织提取液:6mol/L盐酸,自备浓盐酸:H2O(V/V)= 1:1,室温保存 

细胞提取液:液体100mL×1 瓶,4 保存  

试剂一:液体10mL×1 瓶,4 避光保存  

试剂二:液体10mL×1 瓶,4 避光保存

脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)操作步骤:

一、羟脯氨酸提取:  

1. 组织:取约0.2g 样品于玻璃管,加入2mL的组提取液,置于110℃烘箱,水解612小时,16000rpm,25℃,离心20min,用提取液定容2mL,取上清待测。  

2.  细胞:取约500 万个胞,加入1mL 的细胞提取液,于高压消毒器中15 磅保持30min,自然降压后待测。

二、测定操作:

 

对照管

测定管

样本(uL)

 

60

试剂一(uL)

60

60

混匀,室温静置20min

试剂二(uL)

60

60

H2O(uL)

180

120

混匀,60℃,20min,取出后室温静置15 min,测定A560。(A560=A测定-A对照)

羟脯氨酸含量计算:

用微量比色皿测定的计算公式:

标准曲线:y=64.875x+ 0.0251,R2=0.9991  

(1)按组织计算  

HYP含量(mg/g) =(A560-0.0251)÷64.875×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)  

                         =0.154×(A560-0.0251)÷W  

(3)按细胞计算:

HYP含量(mg/104cell)= (A560-0.0251)÷64.875×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)

=0.077×(A560-0.0251)÷细胞数量(万个)

V反总:反应体系总体积,0.3mL; V样:反应中样本体积,0.06mL;V样总:加入提取液体积,mL; W:样本质量,g。

用96孔板测定的计算公式如下:

标准曲线:y=32.4375x+ 0.0251,R2=0.9991  

(1)按组织计算  

HYP含量(mg/g) =(A560-0.0251)÷32.4375×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)  

                         =0.308×(A560-0.0251)÷W  

(3)按细胞计算:

HYP含量(mg/104cell)= (A560-0.0251)÷32.4375×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)

=0.154×(A560-0.0251)÷细胞数量(万个)  

V反总:反应体系总体积,0.3mL; V样:反应中样本体积,0.06mL;V样总:加入提取液体积,mL; W:样本质量,g。

 

注意事项

1OD值大于0.8,样品适当稀释再测定,注意计算公式乘以稀释倍数

2试剂有一定的毒性,请操作时做好防护措施,防止吸入或与皮肤接触