二硫键的存在会降低蛋白质的溶解性，从而影响电泳的分辨率，因此一般需要使用还原剂打开蛋白质中或蛋白质亚基间的二硫键。二硫键问题对碱性蛋白尤为突出，因为在碱性环境中，二硫键形成速度更快。

Bio-Rad 提供以下还原剂和烷化剂：

• 二硫苏糖醇 (DTT)，一种常用的巯基还原剂。 DTT 的等电点约为 8，可能不能 IEF 试验全程都保持活性。 在等电聚焦过程中，DTT 可能会带上负电，迁移出 IPG 胶条，导致二硫键重新结合 (Görg 2000, Hoving 2002)
• 三丁基膦 (TBP)，一种含磷还原剂，所需浓度低于 DTT，在较宽的 pH 范围内具有活性。 TBP 在整个聚焦过程中都与蛋白结合在一起
• 碘乙酰胺是烷基化试剂，它可与巯基永久性结合，防止二硫键再次形成。蛋白样品经还原剂处理后再使用烷化剂保护，可防止由于氧化交联发生聚合和沉淀，保证蛋白质在整个电泳过程中保持可溶性。经还原－烷基化试剂处理的样品，可以在 2-D 谱图上获得更多的蛋白点，提高重复性，并且减少 2-D 图，尤其是碱性区域的条纹现象。

ReadyPrep 还原-烷基化试剂盒包括 TBP 和碘乙酰胺，并提供进行还原和烷基化的完整试验方法说明。

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