G-418（Geneticin，遗传霉素）是一种氨基糖苷类抗生素，在分子遗传试验中，是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。G-418（Genetici-n,遗传霉素）可以干扰80S核糖体的功能，并影响真核细胞中蛋白质的合成，主要用于哺乳动物、植物或酵母细胞的选择。G-418 Genetic-in, 遗传霉素）对细菌、酵母、高等植物、哺乳动物细胞、原虫和蠕虫均有毒性，其抗性基因为显性表型，在Tn601（903）和Tn5转座子上都有定位。虽然这个基因来源于细菌，但也可以在真核细胞中表达。将抗性基因引入细胞可引起对G-418的抗性，使细胞能够在含有G-418的培养基中生长。G418的这一选择特性，已广泛应用于基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面。
        G-418溶液经过滤除菌，一般工作浓度为50～1000ug/ml不等，不同类型的细胞需要根据实验确定最佳浓度。

液体

50mg/ml

溶剂：100mM HEPES

一、常用筛选浓度：
一般来说，刚开始筛选转化子需要高浓度的G418，并用一个较低浓度的G418用于维持培养。生长条件，细胞类型和其他的环境因素都可能影响G418的用量，因此第一次使用的实验体系建议通过杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。通常情况，哺乳动物细胞筛选范围200-2000 μg/mL；植物细胞：10-100 μg/mL；酵母细胞：500-1000 μg/mL；网柄菌属：10-100μg/mL；
以下是一些细胞类型使用G418筛选使用的浓度，可做参考。

细胞类型	有效浓度	应用
网柄菌属	（1）10μg/mL； （2）30μg/mL	（1）培养在培养液中； （2）培养在冻干细菌上
哺乳动物	（1） 400 -1000μg/mL； （2）200μg/mL	（1）用于筛选； （2）用于维持生长
植物	（1）25-50μg/mL； （2）10μg/mL	（1）用于筛选； （2）用于维持生长
酵母	（1）500μg/mL； （2）125-200μg/mL	（1）用于筛选； （2）用于维持生长
细菌	8-16μg/mL	用于筛选

二、杀灭曲线的建立：
为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择6个浓度。处理分裂期的细胞时G418的活性最强，因此在添加G418之前需要让细胞培养一段时间。
1、第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO₂培养过夜；
【注意】：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2、根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定0，50，100，200，400，800，1000 μg/mL。
3、第二天：去除旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4、 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5、按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

三、稳定转染细胞的筛选：
1、转染48h后，用含有适当浓度的G418筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。
【注意】：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2、每隔3-4天更换含有药物的筛选培养基。
3、筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4、挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5、之后更换正常培养基培养即可。

1、本产品经0.1μm过滤除菌，使用时应注意无菌操作，避免污染；
2、本产品为浓缩液，请根据需要稀释后使用；
3、2℃～8℃中解冻，混匀后使用，切忌反复冻融，用量较少时建议分装冻存；
4、2℃～8℃中保存12个月内有效；
5、本产品仅用于科研或进一步研究使用，不用于诊断和治疗。

G-418硫酸盐溶液;Geneticin solution

7.2-7.4

-20℃，避光，有效期24个月。