150 nm磁转染试剂描述浓度使用方法储存/保存方法技术指标注意事项别名
产品描述 |
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描述 |
150 nm磁转染试剂(PEI@Fe3O4),具有高负载量以及高的表面正电荷,因而具有高的转染效率,安全环保无污染,胶体稳定性好,同时具有优良的磁共振成像能力。产品为褐色澄清水胶体,已采用0.22微米滤膜过滤除菌、操作简单、在磁标板(24或96孔)作用下易被细胞吞噬、可用于DNA或RNA的高效转染实验研究。
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浓度 |
1mg/mL
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使用方法 |
转染方法: 不同细胞系的最佳实验条件有所不同,因此需要调整 DNA 或 RNA 的使用量及不同成分间的比例,获得最佳的实验效果。以下举例的实验方法在多个细胞系中使用成功,可作为最短的孵育时间获得好的转染效果的方法指导。
组织培养皿
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每孔细胞数 |
DNA量(ug)) |
150 nm磁转染试剂(µL) |
转染体积* (mL) |
96孔培养板 |
(0.5-2)×104 |
0.1-0.5 |
0.1-0.5 |
0.2 |
24孔培养板 |
(0.5-1)×105 |
0.5-2 |
0.5-2 |
0.5 |
6孔培养板 |
(1-4)×105 |
2-6 |
2-6 |
2 |
60mm 培养皿 |
(5-10)×105 |
6-8 |
6-8 |
5 |
90-100mm 培养皿 |
(1-2)×106 |
8-12 |
8-12 |
10 |
T-75 培养瓶 |
(2-5)×106 |
15-25 |
15-25 |
15-25 |
*转染体积 = 培养基体积 + 磁转染试剂/DNA 复合物体积。
磁转染试剂-贴壁细胞转染方法:
1、接种贴壁细胞,在铺满 60-80%时进行磁性转染。如有必要可以在更换不含血清的新鲜培养基后(血清可能影响转染复合物的形成),立即进行转染。 2、将需要量的磁性纳米颗粒置于微量离心管中,按1:1的量加入用无血清细胞培养液稀释好的DNA。DNA 的推荐使用量为 50-300 ng/cm2 培养皿,如上表:(96 孔板:0.1-0.5 µg/孔,24 孔板:0.5-2 µg/ 孔 6 孔板:2-6 µg/孔) 3、37℃孵育 15-30 min。 4、将孵育好的 DNA/磁性纳米颗粒复合物加至细胞中,将培养板放置于磁标板上,37℃孵育 10-20 min。 5、由于加入无血清和无添加剂的转染复合物后导致如血清、抗生素或其他添加剂被稀释,或转染体系中,细胞培养液不含血清时,需更换细胞培养液(选做)。 6、置于 37℃,5%CO2,培养箱中培养。 7、转染后 48 小时之后可以形成稳定转导的细胞,将细胞转移到含有适当抗生素的新鲜培养基中进行筛选。
磁转染试剂– 悬浮细胞转染方法: 1、将需要转染的细胞用培养基(有或无血清或添加剂稀释,根据细胞类型及对血清敏感程度决定)稀释至 5×105–1×106/mL。 2、将需要量的磁性纳米颗粒置于微量离心管中,按1:1的量加入用无血清细胞培养液稀释好的DNA。3、 37℃孵育 15-30 min。 4、按以下推荐的 3 种方法之一,将细胞沉到培养皿底部,以增加细胞与磁性纳米颗粒的接触。 (1)在聚赖氨酸包被的板上接种细胞,后续按照贴壁细胞的实验方法操作 (2)短暂离心细胞(2 分钟)使其形成细胞团,后续按照贴壁细胞的实验方法操作 (3)将细胞悬浮液与磁转染试剂混合,每 mL 细胞加 30 µL 磁转染试剂孵育 10-15 分钟,按表中建议的转染体积,将细胞加到培养板中,置于磁标板上孵育 15 min,将孵育好的 DNA/磁性纳米颗粒复合物加至细胞中,将培养板放置于磁标板上,37℃孵育 10-20 min。小心将细胞培养上清吸出(此过程不要移动磁标板,且要避免吸到细胞),更换新鲜培养液,将培养板从磁标板上移开,置于 37℃,5%CO2,培养箱中培养。
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储存/保存方法 |
4℃密封保存,有效期12个月。
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技术指标 |
(1)透射电子显微镜尺寸与形貌:为 10 nm 左右的磁性纳米颗粒聚集体,主要分布在 100-200 nm 之间 (2)水动力尺寸: 约 130 nm (3)表面 Zeta 电位:大于+50 mV (4)磁性:具有超顺磁性,饱和磁化强度约 60 emu/g Fe
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注意事项 |
使用和保存过程中应避免冻融,取用后及时盖紧瓶盖。
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基本信息 |
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别名 |
150 nm magnetic transfection kit
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