细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)
 

　　操作步骤(仅供参考)：
 

　　(一)、MDC单独染色：
 

　　1、 用去离子水稀释10×Wash buffer1×。
 

　　2、 800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。
 

　　3、 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度10 6 /ml。
 

　　4、 取适量90μl的细胞悬液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，轻轻混匀。
 

　　5、 室温避光染色15～45min。
 

　　6、 800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。
 

　　7、 加入100μl的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。
 

　　8、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。
 

　　细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)
 

　　(二)、与EB双染色：
 

　　1、 用去离子水稀释10×Wash buffer1×。
 

　　2、 800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。
 

　　3、 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度10 6 /ml。
 

　　4、 取适量90μl的细胞悬液新的EP管中，分别加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，轻轻混 匀。
 

　　5、 滴加于在玻片上，室温避光染色15～30min，加盖玻片。
 

　　6、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm)，计数并拍照。
 

　　注意事项：
 

　　1、 MDC Stain和EB试剂有一定毒性，请小心操作。
 

　　2、 吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
 

　　3、 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
 

　　4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
 

　　相关文献：
 

　　《Effect of Gpx3 gene silencing by siRNA on apoptosis and autophagy in chicken cardiomyocytes.》 作者:Yafan Gong  Jie Yang  Jingzeng Cai  Qi Liu  Jun min Zhang  Ziwei Zhang 期刊:J. Cell. Physiol. 影响因子:4.522 PMID:30515791
 

　　《Upregulation of DAPK2 ameliorates oxidative damage and apoptosis of placental cells in hypertensive disorder complicating pregnancy by suppressing human placental microvascular endothelial cell autophagy through the mTOR signaling pathway》 作者:Yan Wang,Lian-Lian Liu,Yuan Tian,Yang Chen,Wen-Hui Zha,Yang Li,Fu-Ju Wu 期刊:Int. J. Biol. Macromol. 影响因子:4.784 PMID:30243997
 

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