柠檬酸合酶（CS）活性检测试剂盒BC1065

产品名称：柠檬酸合酶（CS）活性检测试剂盒

产品型号：BC1065

产品特点：柠檬酸合酶（CS）活性检测试剂盒
测定意义：
CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理：
S催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在 412nm处有特征吸光值。

BC1065柠檬酸合酶（CS）活性检测试剂盒的详细资料：

柠檬酸合酶(CS)活性检测试剂盒

CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。 CS 催化乙酰 CoA 和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶 A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的 DTNB 转变成黄色的 TNB，在 412nm 处有特征吸光值。

柠檬酸合酶(CS)活性检测试剂盒

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离： ① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 提取液和 10μL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。 ② 将匀浆液 600g，4℃离心 5min。 ③ 将上清液移另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。 ④ 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 CS。 ⑤ 在沉淀中加入 200μL 试剂一和 2μL 试剂二，反复吹打充分混匀，用于 CS 测定。 ⑥ 柠檬酸合酶酶活即沉淀和上清液中的酶活之和。

1、组织中 CS 活力的计算: （1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：37℃或 25℃下每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。 CS 上清（U/mg prot）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷（Cpr 上清×V 样本）÷T=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清 CS 沉淀（U/mg prot）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷（Cpr 沉淀×V 样本）÷T =1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀 CS（U/mg prot）=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清+1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀。（2）按样本鲜重计算：单位的定义：37℃或 25℃下每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。 CS 上清（U/g 鲜重）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷（W×V 样本÷V 提取）÷T =1050×ΔA 上清÷W CS 沉淀（U/g 鲜重）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷（W×V 样本÷V 沉淀）÷T =212×ΔA 沉淀÷W CS（U/g 鲜重）=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷W+212×ΔA 上清÷W。 2、细菌或培养细胞中 CS 活力的计算: （1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：37℃或 25℃下每 mg 蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。 CS 上清（U/mg prot）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷（Cpr 上清×V 样本）÷T=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清 CS 沉淀（U/mg prot）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷（Cpr 沉淀×V 样本）÷T=1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀 CS（U/mg prot）=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清+1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀。（2）按细菌或细胞密度计算：单位的定义：37℃或 25℃下每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。 CS 上清（U/104 cell）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷（500×V 样本÷V 提取）÷T=2.1×ΔA 上清 CS 沉淀（U/104 cell）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷（500×V 样本÷V 沉淀）÷T =0.42×ΔA 沉淀 CS（U/104 cell）=CS 上清+CS 沉淀=2.1×ΔA 上清+0.42×ΔA 沉淀。第 3 页 共 3 页 ε：TNB 的消光系数，13.6×10-3mL/(nmol·cm)；V 反总：反应体系总体积，0.2 mL；d：比色皿光径，1cm；V 样本：加入的样本体积，0.007mL；V 提取：提取液体积，1mL；V 沉淀：溶解沉淀的总体积，0.202mL；T：反应时间，2min；Cpr 上清：上清液的蛋白浓度，mg/mL；Cpr 沉淀：沉淀溶解后的蛋白浓度, mg/mL；W：样本鲜重，g。